Kullanım Talimatları

Kullanım Talimatları
SAS-3 İdrar Analizi
Katalog No: 300400
KULLANIM AMACI
SAS-3 İdrar Analiz Kiti agaroz jel elektroforez ile konsantre edilmemiş idrar
numunelerinin taraması için tasarlanmıştır.
Üriner proteinler böbrekte filtre edilen plazma proteinlerinden oluşur. İdrarda anormal
plazma proteinler renal fonksiyon değerlendirmesinde büyük değere sahiptir.
Proteinüri ile ilgili çalışmalar atılmış proteinlerin miktar ve türünün kantitatif ve kalitatif
değerlendirmesini içermelidir1-5. İmmuno çökme ile spesifik protein türlerinin tespiti ile
çiftleşmiş idrar proteinlerinin elektroforetik ayrışım kombinasyonu, Dysglobulinaemias
1-5
ile ilişkili proteinüri-Fizyolojik, Glomerüler (seçici ve seçici olmayan), Boru ve
proteinüri’in çeşitli türlerinin farklılaşmasına olanak sağlar.
SAS–3 İdrar Analizi kiti bir agaroz jelde yüklere göre idrarda proteinleri ayırır.
Proteinler daha sonra kantitatif veya kalitatif yorum ve görüntüleme için boyanır. Kitte
kullanılan yüksek duyarlılıklı boya konsantrasyonsuz test edilecek olan çoğu idrar
örneklerin boyanmasını sağlar. İdrar Protein İç Standart’ın kullanımı densitometre
olarak belirlenecek olan protein konsantrasyonunun tek tek bant ya da idrar total
protein yaklaşımına olanak sağlar.
UYARILAR VE ÖNLEMLER
Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini
ağzınızla pipetlemeyin yada yutmayın. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven
giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun.
BİLEŞENLER
1. SAS-3 İdrar Analiz Jel (x10)
Agaroz koruyucu olarak sodyum azid ve thimersal ile bir Tris/Barbital buffer içerir.
Paket içindeki jel kullanım için hazırdır.
2. Konsantre Mor Asid Boya(1x75ml)
Konsantre mor asid boya içerir. Şişe içeriği 700ml saf su ile dilüe edin. Kullanım
öncesi karıştırılır ve filtre edilir. İyi kapatılmış bir şişede saklanır.
3. Konsantre Boya Arındırıcı Solüsyon (2x 10g Destain A, 2x 40ml Destain B)
Boya arındırıcı A içeriği 2 litre saf su ile dilüe edin. Sonra Boya Arındırıcı B
içeriğini ekleyin ve ilaveten 3 litre saf su yavaşça ekleyin.
4. Yıkama Solüsyonu (2x50ml)
Konsantre Yıkama Solüsyonu içerir. Şişe içeriğini 5 liter saline solüsyon ile dilüe
edin.
5. Diğer Kit Bileşenleri
Her kit kullanım için talimatlar ve 10 jeli tamamlamak için yeterli miktarda C,D
kurutma kağıtları ve kurutma tarağı içerir.
SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ
1. SAS-3 İdrar Analiz Jel
Jeller 15-30 derecede saklanmalıdır ve paket üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar stabildir. DOLABA KOYMAYIN VEYA DONDURMAYIN. Jelin
bozulması : 1) jelin dondurulması kristal görünümü belirtir, 2) jelin kuruması,
1
çatlama ve kuruluğu veya 3) bakteriyal ya da fungal kaynaklı agarozun
kontaminasyonunu belirtir.
2 - Mor Asit Boya
Konsantre boya 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son
kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boya solüsyonu 15-30 derecede 6 ay
stabildir. Boya kapasitesinin azalmasını önlemek için derhal kullanılan boyanın
çıkarılması tavsiye edilir. Zayıf boyama performansı, boya solüsyonunun
bozulduğunu belirtebilir.
3 - Boya Arındırıcı Solüsyon
Konsantre boya arındırıcı solüsyon 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket
üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boyadan arındırıcı
solusyon 15-30 derecede 6 ay stabildir.
4 -Yıkama Solüsyonu
Konsantre yıkama solüsyonu 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde
belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe yıkama solüsyonu 15-30
derecede 6 ay stabildir. Bulanıklık yıkama solüsyonunu bozukluğunu belirtebilir.
SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER
Kat. No. 310200 Sample Applicator Blades (1 x 10)
Kat. No. 310300 Sample Applicator Blades (5 x 10)
Kat. No. 210100 Disposable sample cups (100)
Kat. No. 310210 SPIFE Urine Protein Accessory kit
Kat. No. 3380 SPIFE Urine IFE Allignment Guide
Kat. No. 3100 REP Prep
Saline solusyonu (%85 NaCl)
Aşağıdaki öğeler standart idrar analizi için gerekli değildir ancak İdrar IFE ve daha
fazla araştırma için gerekli olabilir:
Kat. No. 320100 Antiserum to Human Urine Total Protein (5ml)
Kat. No. 320200 Antiserum to Human Urine Micro Proteins (5ml)
Kat. No. 320300 Antiserum to Human Urine Macro Proteins (5ml)
Kat. No. 320400 Antiserum to Human GAM Proteins (5ml)
Kat. No. 320700 Antiserum to Human Free & Bound Kappa Light Chain (5ml)
Kat. No. 320800 Antiserum to Human Free & Bound Lambda Light Chain (5ml)
Kat. No. 320500 Antiserum to Human Free Kappa Light Chain (5ml)
Kat. No. 320600 Antiserum to Human Free Lambda Light Chain (5ml)
Kat. No. 320900 Antiserum to Human Urine Pentavalent/Albumin (5ml)
Kat. No. 321000 Antiserum to Human Urine Pentavalent (5ml)
Kat. No. 9249 Antiserum to Human IgD
Kat. No. 9250 Antiserum to Human IgE
NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI
Tercih edilen numune taze toplanan idrardır. Numuneler 2...6°C de 72 saate kadar ya
da -20°C de 2 haftaya kadar buzdolabında saklanmalıdır. Total protein 1000mg/L’ın
üstünde olmazsa numuneler konsantrasyon veya dilüsyon olmadan başlangıçta
kullanılmamalıdır.
2
ADIM-ADIM PROSEDÜR
1. Cihaza aşağıdaki parametreleri programlayın:
(SPIFE COMBO /SPIFE
programlanmalıdır)
2000
kullanıcıları
ileri
elektroforez
Adım
Zaman(dk:sn) Sıcaklık(derece) Voltaj
Numune Yükleme
00:30
21
Numune Uygulama
00:30
21
Tekrar testleri – 10 uygulama için ‘load sample, apply sample’ .
Elektroforez
06:30
21
650
Kurutma
08:00
54*
adımına
sadece
Diğer
Hız 1
Hız 1*
*1 SPIFE 3000 / SAS-3 için pozisyon 2 kullanılır.
*2 Eğer immunfiksasyon protokolune devam edilicekse, Dry adımını dahil etmeyin.
2. Sadece SPIFE 3000 / SAS-3 kullanıcıları: Aplikatör ucunu cihaz üzerindeki
pozisyonuna yerleştirin:
NOT: İdrar Tarama için: 1-20, 21-40 ve 41-60 pozisyonları kullanılabilir. Immunofiksasyon
için: 7, 14, 27, 34, 47 ve 54 pozisyonlarını örnek ile yüklenmez.
3. SPIFE 3000 / SAS-3 kullanıcıları: Tek kullanımlık uygun numune kaplarına 35μl
numune pipetleyin. Buharlaşmadan numuneleri koruyun.
4. Jeli paketinden çıkarın ve kaplamasını atın.
5. Jelin yüzeyi kurutma kağıdı C ile kurutulur, kurutma kağıdı alınır.
6. SPIFE Combo / SPIFE 2000 kullanıcıları: SPIFE Urine IFE Alignment Guide
üzerine jeli koyun ve hizayıcı pimleri kullanarak jel üzerine templaytı koyun.
Templaytın üzerine kurutucu A koyun ve iyi temas ettiğinden emin olmak için
parmağınızla yarıkları ovun. Kurutucuyu çıkarın ve 8. adımda kullanmak üzere
saklayın. Jeli çıkarın.
7. 2ml REP Prep’i bölmenin sol tarafına boşaltın ve dikkatlice bölme içine jeli koyun,
bölme içindeki iğneler ile jel bağlarındaki delikleri hizalayın ve jelin altında
kabarcık oluşturmamaya dikkat edin. Elektrot kollarına elektrotlar eklenir böylece
jel blokları ile temasa ederler.
8. SPIFE Combo / SPIFE 2000 kullanıcıları: Uygun yarığa 3μl örnek uygulayın ve
10 dakika için emmesini bekleyin. Örnek emildikten sonra, 6 adımda ayrılmış
kurutucuyu A ile temaplayti kurutun ve her kurutucuyu hem de templaytı çıkarın.
9. Urine Analysis test programını seçin ve ardından elektroforez yapmak ve jeli
kurutmak için komutları seşin. ( SPIFE 3000 / SAS-3 kullanıcıları için: örnekleri
uygulayın).
10. Elektroforezin ardından, elektrotları ve Gel Block Remover kullanarak her iki jek
bloklarını çıkarın.
3
NOT: Kuru jeller numunede tüm proteinlerin bulunduğunu göstermek için boyanabilir
(bkz. Boyama protokol). Islak jelleri ilgili proteinleri göstermek için spesifik
antiserumlar ile inkübe edebilir (bkz. immunofiksajyon protokol).
BOYAMA PROTOKOL
11. Cihaza aşağıdaki parametreleri programlayın:
12. Boyama tank tutucusuna jeli koyun.
13. Boyama biriminde Urine Analysis test programı seçilir ve ardından jele boyama
ve kurutma komutu verilir.
14. Boyama işleminin sonunda, boyama alanından jeli alın. Jel şimdi incelenmek için
hazırdır.
IMMUNOFIKASYON PROTOKOLU
11. Cihazda aşağıdaki parametreleri programlayın.
12. Jel üzerine antiserum uygulama templaytını yerleştirin. NOT: İşlenmiş antiserum
kanalları jel üzerine uygun yere yerleştirilir.
13. Immunoglobin hatlarının deliğine 2 damla (veya 60μl) uygun antiserum/
sabitleştirici uygulayın. Antiserumların tamamen kanallarının doldurduğuna emin
olun.
14.Jeli inkübe edin.
15.İnkübasyon sonrası antiserum templayt delikleri içine kurutucu bir tarak yerleştirin.
Fazla antiserumun emilmesi için 2dk bekletin, sonra tarakları ve templaytı jel
yüzeyinden alın.
4
16. Jelin yüzeyine bir kurutucu D yerleştirin, 10 saniye bırakın ve geri alın.
17. Kurutucu D yi alın ve jeli kurutun.
Not: Kullanımdan hemen sonra, antiserum templaytı biyosidal deterjan ile
temizleyin. Eğer mümkün ise, tüp fırçası veya küçük test tüp yıkayıcısı ile dip
kısımları temizlenir. Antiserum templaytı kuruması için bırakın. Antiserum
uygulama adımı boyunca templaytın yüzeyindeki antiserumun birikmesi hava
kabarcığı olmasına neden olacaktır. Deliklerde su kalması, sonraki kullanım için
antiserum uygulamasını engelleyecektir. Hava sirkülasyonunu arttırmak için
templayt baş-aşağı saklanır.
18. Boyama tankı tutucusuna jeli koyun.
19. Boyama biriminde IFE test programı seçin ve ardından jele boyama ve kurutma
komutu verilir.
20. Boyama siklusunun sonunda, boyama alanından jeli alın. Jel şimdi incelenmek
için hazırdır.
SONUÇLARIN YORUMLANMASI
Monoklonal proteinlerin çoğunluğu protein paternin gama bölgesine katotik alana göç
eder fakat anormal doğasından dolayı protein elektroforezinde globulin bölgesinde
herhangi bir yere de göç edebilir. İmmünofiksasyon paternde monoklonal protein
bant serum protein paterni üzerinde anormal bant gibi aynı şekil ve pozisyonda
oluşur. Anormal protein reaksiyon verdiği antiserum tipi ile tanımlandırılır.
Anormal proteinin düşük konsantrasyonları varsa, anormal bant normal poliklonal
immünoglobulin içinde bir bant gibi görülebilir. Ayrıca bir bant, bir büyük poliklonal
immünoglobulin varsa bir poliklonal arka planında görülebilir.
İstek üzerine Helena BioSciences den, Monoklonal Gammopatilerin tanımlandırılması
için İmmünofiksasyon yayınına ulaşılabilir.
İdrar immunofiksasyonu:
Proteinuria’ nın tipi
Normal ürin
Glomerular
Jelde görülen bantlar
küçük albumin band
Albumin, alfa-1, beta,
gama
Mevcut proteinler
albumin
albumin, alfa-1
antitripsin, transferrin,
gama globulinler
Tubüler
alfa-1, alfa-2, beta
Taşan
gama veya çeşitli
Retinol bağlayıcı Protein,
beta2-mikroglobulin,
alfa-2 mikroglobulin
immunoglobulins,
Serbest hafif zincirleri
KALİTE KONTROL
Normal bir serum örneği (serum fizyolojikte 1:100 oranında dilue edilmiş) her bir
bandın pozisyonunu belirlemek için kullanılabilir.
5
SINIRLAMALAR
1. Antijen fazlalığı
Presipitasyon alanında antijen fazlalığı, eğer antikor miktarı az veya
antijen/antikor eşitsizliği varsa meydana gelecektir. IFE de antijen fazlalığı
genellikle hasta numunesindeki immünoglobulin fazlalığına dayanır. Antijen
fazlalığı prozoning ile karakterize edilir (kenarlarının etrafının boyanması ile
immunofixed protein bandının merkezinde boyanmamış alanlar). Numunenin
yüksek dilüsyonu immünoglobulin konsantrasyonunu optimize etmek için
kullanılmalıdır.
2. IFE antiserumu ile reaksiyon göstermeyen gama bölgesindeki Katodik bant.
C reaktif protein (CRP), akut inflamatuar yanıt sonucu hastada tespit edilebilir.
CRP, serum protein paterninin katodik sonuna yakın bir bant olarak görülür.
CRP’nin destekleyici kanıtları, yükseltilmiş alfa 1-Anttripsin ve haptoglobulindir.
CRP bantlı hastalar, muhtemelen CRP için test edildiği zaman yüksek seviyeye
sahip olacaktır.
3.Kappa ve Lambda antiserumları ile reaksiyon vermez.
Genellikle bir numune ağır zincir antiserumu ile reaksiyon verir fakat belli hafif
zincir reaksiyonu vermez. Bu durumda, aşağıdaki durumlar ihtimal dışı bırakılır;
a)ağır zincir hastalığı, b)hafif zincirlerin çok yüksek konsantrasyonları sonucu
antijen fazlalığı, c)hafif zincirinin düşük konsantrasyonları, d)antiserum ile
reaksiyon vermeyen atipik hafif zincir molekülü, e)saklı hafif zincir determinantları
ile hafif zincirleri ( IgA ve IgD ile genellikle görülür) Kesin sonuçlar almak için, test
çalışması; a) antikor/antijen eşitliliği sağlamak için çok yüksek veya düşük
numune dilüsyonu, b) atipik immünoglobulinlerin tespiti için bir üreticiden daha
fazla gelen antiserum, c) ‘reveal’ hafif zincirler için beta-2-merkaptoethanol ile
numune işlemi içerir.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
a) Hassasiyet
Tamamlanan jelde bir ayrık bant gibi görünen proteinin en düşük konsantrasyonu
20mg/L olarak belirlenmiştir.
b)Doğrusallık
Metodun doğrusallığı, jel performansı için densitometre özelliğinin bir fonksiyonudur.
Laboratuarda kullanılan densitometreye dayalı metodun doğrusallığının belirlenmesi
her müşteriye tavsiye edilir.
BİBLİYOGRAFİ
1. Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier
Institute, Paris, France, 1988.
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’
Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75.
3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A
Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein
Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172.
4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different
Electrophoretic Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262.
6
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S.
‘A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin.
Biochem., 1997, 34 : 371-374.
6. Alper, C.A and Johnson, A.M., ‘Immunofixation Electrophoresis: A Technique for the Study
of Protein Polymorphism’, Vox. Sang., 1969; 17 : 445-452.
7. Alper, C.A.,’Genetic Polymorphism of Complement Components as a Probe of Structure
and Function’, Progress in Immunology. First International Congress of Immunology. 1971 :
609-624, Academic Press, New York.
7