Diferansiyel (Ayırtedici) Boyama Bakterilerin gruplarını ayırtetmek için kullanılır. Gram Boyama Asit-Fast Boyama GRAM BOYAMA En önemli ve en sık kullanılan ayırdedici bir boyama tekniğidir. Bakterileri hücre duvarlarının kimyasal ve fiziksel özelliklerine göre iki büyük gruba ayırmak için kullanılan bir yöntemdir.Bakteri örneğinin tanılanmasında ilk aşama olan Gr(+)/ Gr (-) ayırımının yapılmasında kullanılır. Bu metodu bulan kişi Danimarkalı bilim adamı Hans Christian Gram’dır. Bakteriler Gr(+) ve Gr (-) olarak iki ana gruba ayrılırlar. Bu farklılık gram boyama reaksiyonundan kaynaklanır. Gram reaksiyonu ise bakterilerin hücre çeperi farklılıklarından temellenir. Cell walls of bacteria(1) Gram - Gram + -Hücre çeperi hücreyi dış etkilerden korur ve hücreye şakil verir. -Bakterilere dayanıklılığı veren esas yapı çeperde bulunan peptidoglikandır. - Peptidoglikan esas olarak 2 şeker türevinden ve bir grup amino asitten oluşur. - Peptidoglikanda bulunan şekerler: - N-acetylglucosamine (NAG). - N-acetylmuramic acid (NAM). -Peptidoglikan tabakada bulunan amino asitler: -L-alanin -D-alanin -D-Glutamik asit -Lisin (Gr +) veya DAP (Gr -) Peptidogikan yapısı • Gram Pozitif: - Peptidoglikan tabakası kalın. - Teikoik asit oldukça büyük miktarda bulunur. • Gram Negatif: - Gram (+)’lerden daha kompleksdir.. - Kalın dış membran; lipidleri, lipopolisakkaridleri ve lipoproteinleri içerir. - peptidoglycan tabaka incedir. The Gram-negative outer membrane(1) Gram-Negatif ve Gram-Positif Bakteriler Arasındaki Farklılıklar Gram-Negatif Bakteri Gram-Pozitif Bakteri Hücre çepri kompleks. Kalınlığı 10nm Basit hücre çeperi. Kalınlığı 20-80nm Hücre duvarında 2 tabaka var Hücre duvarındaki tabaka sayısı 1 Peptidoglikan ince. Oldukça kalın. Teikoik asid yok Teikoik asid var Lipid ve lipoprotein içeriği %58 %0-3 Lipopolisakkarid %13 %0 Protein içeriği %9 %0 Penicilin’e duyarlı değil Duyarlı Kırmızı pembe görünür Mor renkte görünür. Gram Boyama Prosedürü a small drop of water 3 times to heat-fix a small amount of the bacteri spread the bacteria/water completely air dry mixture crystal violet for one minute gram's iodine solution for one wash with %95 etanol for 10 minute and wash with water. seconds and wash with water wash with water safranin for one minutes and wash with water Gram Boyama ilk boya mordant dekolorizasyon karşıt boya pozitif negatif Gram Boyama Gram + hücreler Gram – hücreler İlk boya Crystal violet Mor Mor Mordant: Iodine Mor Mor Dekolorize ajan: Alkol Mor Renksiz Karşıt boya: Safranin Mor Pembe/kırmızı Gram Boyama Proteus vulgaris G-basil Streptococcus pneumoniae G+ kok Staphylococcus epidermidis G+ kok Gram boyama – karışık kültür Mikrometrik lam (her aralık 10 µm= 0,01mm) Mikrometrik oküler Örnek: Mikrometrik okülerde bir streptobasilin boyu 5, eni 1 aralıktır. Mikrometrik okülerin 10 aralığı mikrometrik lamın 1 aralığına eşit ise basilin eni ve boyu kaç µm’dir? mikrometrik okülerin 10 aralığı mikrometrik okülerin 1 aralığı 1 lam aralığı ise? ?