Mikrobiyoloji Laboratuvarı Ders 5 Arş. Gör. Ayşenur YAZICI Erzurum Teknik Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü 2017 Gram Boyama: Mikrobiyolojide en önemli boyama yöntemdir. Bu boyama bakterileri iki büyük sınıfa ayırır. a)Gram positive: MOR b) Gram negative: KIRMIZI 2 Gram Boyama Hans Christian Gram tarafından 1882 yılında uygulanan boyama tekniğidir. Bakteri tanımlamada kullanılan ilk teknik olarak çok önemlidir. Gram boyamanın temeli, bakterilerin hücre duvarı farklılıklarıdır. Bakterilerin 2 Büyük Sınıfı Bakteriler hücre duvarı yapılarının farklılığından dolayı gruba ayrılırlar. Gram Pozitif Gram Negatif Bakteri Morfolojileri Değişik Morfoloji Tipleri Kompleks boyama olan Gram boyama 3 aşamadan oluşur. 1. Slide smear Hazırlama: Bakteri örneklerinin lam üzerine hazırlanması, fikse edilmesi. 2. Gram boyama: Sıra ile boyamaların yapılması. 3. Görüntünün alınması: Mor renkli görülen bakteriler Gram (+), pembe renkli görülenler ise Gram ( - ) bakterilerdir. Fiksasyon • Petri kaplarından veya eğik tüp kültürlerinden alınan mikroorganizma örnekleri slide üzerine yayılarak fiksasyon yapılır. • Burada çok hücre alınmamalıdır. • İnce bir tabaka halinde örnekler havada veya alevden geçirilerek sabitlenir. Bu işleme fiksasyon denir. Gram Boyama Deney Videosu https://www.youtube.com/watch?v=sxa46xKfIOY Deneyin Yapılışı: 1) Sıvı ve katı kültür ortamından öze ile alınıp lam üzerine yayılan bakteri kültürünün havada kuruması sağlanır. 3 defa alevden geçirilerek fiziksel tesbit yapılır. 2) Lam ( preparat ) boya kabına konarak, kristal viyole ile 1 dakika boyanır. 3) 1 dakika sonra kristal viyole boya kabına dökülür. 4) Lam üzerinde kalan boya üzerine lugol ilavesi yapılır. 1 dakika beklenir. 5) 1 dakika sonra boya kaba dökülerek, % 95' lik Etil Alkol ve su ile boya akmayıncaya kadar yıkama İşlemi yapılır. 6) Bu işlemden sonra lam üzerine (preparat) safranin dökülerek 15-20 saniye dakika beklenir. Boya dökülüp, lam yıkanarak kurulanır. Bir damla immersiyon yağı damlatılarak mikroskopla incelenir ( 100 x ). 7) Objektif sahasında görülen mor renkli bakteriler Gram (+), pembe renkli olanlar ise Gram ( - ) olarak adlandırılır. Sonuç