KimyaKongreleri.org

7. Ulusal Afinite Teknikleri Kongresi, Ege Üniversitesi, 13-15 Eylül 2013, Çesme / Izmir
P-23
Tripsin Konjuge Kriyojel Kolon İle Soya Kabuklarından Bowman-Birk
Proteaz İnhibitörünün Saflaştırılması
Burak YILDIZa,b, Umut ÇELİKOĞLUa, Rıdvan SAYa,b, Arzu ERSÖZa,b
a
Anadolu Üniversitesi Yunus Emre Kampüsü Fen Fakültesi Kimya Bölümü 26470 Eskişehir
b
Bionkit LTD. ŞTİ. Anadolu Üniversitesi Yunus Emre Kampüsü Teknopark 26470, Eskişehir
burak_yildiz@anadolu.edu.tr
Özet: Son zamanlarda, hücresel fizyolojik yolların birçoğunda önemli mödülatörler olarak proteaz
inhibitörlerin rolü, kanser model sitemlerdeki hücre içi ve dışı güçlü aktivitelerinden dolayı [1]
köklü kanser kemoperevensiyon ajanlarının bir sınıfı olarak geliştirilmiştir [2,3]. Soya önemli bir
proteaz inhibitör kaynağıdır ve en baskın proteaz inhibitörü ise Bowman-Birk inhibitörüdür (BBI)
[3]. İlk kez 1940’da Bowman tarafından keşfedilen [4] ve 1961’de Birk tarafından saflaştırılan [5]
BBI, aktif konumunu dengeliyebilen ve bir başı baskın tripsin inhibitör diğer başı baskın kimotripsin
inhibitör olarak iyi karakterize olmuş çift başlı bir yapıya sahip yedi disülfit bağı ile ortalama 8 kDa
ağırlığında 71-aminoasit içeren bir proteindir [6]. Bu küçük protein güçlü kanser kemoperevensiyonu
ve antikanser tedavi özellikleri göstermektedir. BBI’ın son yıllarda yapılan çalışmalar sonucunda bir
çok hücre içi ve dışı kanser türünün (örneğin kolon, karaciğer, akciğer, yemek borusu, ağız epiteli,
yumurtalık, prostat, hematopoetik hücreler ve bağ dokusu) [3, 7, 8] baskılanmasında etkili olduğu
bulunmuştur. Son zamanlarda yapılan çalışma sonucunda soya kabuklarının 122F’da (50C0) sabit
sıcaklıktaki suda 4-8 saat arasında muamele edilmesi sonucunda yapısında barındırmış olduğu
BBI’ın büyük bir kısmını suya saldığı bulunmuştur [9]. Yapmış olduğumuz bu çalışmanın ilk
aşamasında sıcak su ekstraksiyonu yöntemi ile soya kabuklarından BBI ekstrakte edilmiştir. İkinci
aşamada, R. SAY ve ark. tarafından geliştirilen ve patenti alınan ANADOLUCA metodu ile
tripsinin BBI’ne yüksek afinite göstermesinden dolayı tripsin konjuge edilmiş kriyojel kolon
sentezlenmiş ve BBI’nün hızlı protein sıvı kromatografisi (FPLC) ile kromatografik olarak ayrımı
gerçekleştirilmiştir. Üçüncü aşamada ise saflaştırılan BBI’nün karakterizasyonu yapılmıştır.
Anahtar Kelimeler: ANADOLUCA, BBI, Afinite, Kriyojel, FPLC
Kaynaklar
[1] Vanaman, T.C. and Bradshaw, R.A., J. Biol. Chem., 1999, 274, 20047.
[2] Kennedy, A.R., Prev. Med., 1993, 22, 796-811.
[3] Y.W. Chen, S.C. Huang, S.Y. Lin-Shiau, J.K. Lin., Carcinogenesis, 2005, 26, 1296–1306.
[4] Bowman, D., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1946, 63, 547-550.
[5] Birk, Y., Biochim. Biophys. Acta, 1961, 54, 378-381.
[6] Birk, Y., Int. J. Pept. Protein Res., 1985, 25, 113--131.
[7] A.R. Kennedy, X.S. Wan., Prostate, 2002, 50, 125–134
[8] T. Saito, H. Sato, N. Virgona, H. Hagiwara, K. Kashiwagi, K. Suzuki, R. Asano, T. Yano, (2007), Cancer
Lett. 253, 249–257.
[9] Palavalli, M.L., Natarajan S.S., Wang, T.T.Y., Krishnan H.B., Food Chem., 2012, 60, 3135−3143.
59
KimyaKongreleri.org