RIDA Quick Cryptosporidium/Giardia Combi

RIDA® Quick
Cryptosporidium/Giardia Combi
Makale no: N 1123
R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D-64293 Darmstadt, Germany
Tel: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20
Χ
1. Kullanım amacı
In vitro diyagnostik kullanım içindir. RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi testi hızlı
immunokromatogrif test olup gaitada,kalitatif olarak Cryptosporidium parvum ve/veya Giardia
lamblia tespiti için kullanılır.
2. Özet ve testin açıklaması
Giardia lamblia bağırsak kamçılısıdır. Morfolojik olarak tropozoitler sadece kısa bir sure host
organizmanın dışında yaşarlar. Bulaşma yüksek derecede, bulaşıcı kistlerle olur.
Giardia kistlerinin yenmesinden sonra insan ince bağırsağında ürer.Tüm dünyada yaygın olup
özellikle yolculuk esnasında olan kronik ishal sebebidir.Kirli sular ve yiyeceklerin yenmesinden
sonra enfeksiyon oluşur. Amerika’da, Giardia lamblia patojeni sıklıkla su yoluyla bulaşıp ishale
sebep olur. Gelişen ülkelerde, 10 yaşın altındaki çocukların % 15-20 sinde hastalığa sebep
olur.Kişilerdeki yetersiz hijyenden, fekal-oral yol ile insandan insana geçer.Geçiş modu özellikle
çocuklar, anaokulu çocukları, homoseksüel kişiler (%19 a kadar) ve kurumlardaki insanlar
arasındadır.Enfeksiyon aynı zamanda çocuklardan ailelerine bulaşabilir.Bebekler ve daha
büyük çocuklarda belirtiler görülmeyebilir.Bununla beraber onlarda kist salgılar ve diğer
insanlara bulaştırır.
Giardia yazın semptomları; akut ya da kronik diare, asimptomatik kist eliminasyonu .İnkübasyon
süresi 3-42 gün arasındadır. Akut enfeksiyon aşağıdaki semptomları gösterir: Ani sulu
isal(sık,sarı, pis koku ve gaz)iştah kaybı,, kusma,halsizlik ve kilo kaybı; kanlı ve mukuslu isal
normalde görülmez.Geçmişte kistler mikroskop ile tespit ediliyordu, bu da deneyimli bir kişi
gerektiriyordu.Bu araştırmalar uzun sürer , kistin çıkması güçlü dalgalanmalara bağlıdır.
Mikroskopla taramaya alternatif aşağıda anlatılan immunokromatografik testdir. Monoklonal
antikorlar kullanır ve mikroskop prosedürüne eş değerde hassas ve spesifiktir.Test hızlı ve
basittir, çalışmak deneyimli bir kişi gerekmez.
Cryptosporidium parvum hayvanlarda çok görülen bir parasit olup özellikle evcil hayvanlarda
önemli patojen bir organizmadır ve calve hastalığında görülür. Çoğu ülkelerde, insanlarda
enfastasyon gözlemlenir, bu günlerde eskiden olduğundan daha fazladır. Tropik bölgelerde olan
gelişmekteki ülkelerde, parasitler sıklıkla endemik ve çocuklar arasında epidemik diareye sebep
olur. İmmunokompetent hastalarda, hastalık kendi kendini gösterir, kendiliğinden gastroenterit
iyileşmesi gibi. Diare 3-10 gün sürer ve ateş, gastrointestinal semptomlar örn. Kusma ve ağrı
gibi,devam eder bu konuda giardiasise benzerlik gösterir. Semptomlar ve etkiler aslında
immunoinkompetent hastalarda daha daha ciddidir ve ısrarla dinmeyen isal görülür.
İnfestasyon, hayvanlardan insanlara kontamine olmuş su ile ve insandan insana geçer.
Komünal fasilitelerin üyeleri, anaokulu çocukları ve yüksek risk grupları, homoseksüel erkekler,
HIV hastaları yüksek risk taşır. Geçmişte, cryptosporidiosis tespiti için kullanılan metot ,
Oocystin gaitaya ve ince bağırsaktan alınan biyopsiye mikroskobik incelemesiydi ve deneyimli
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
2
eleman gerektiriyordu. Bu metoda alternatif metot, hızlı immunokromatografik test tanımlandı.
Bu test monoklonal antikorlar kullanır , mikroskobik prosedüre eşdeğer hassasiyet ve
özgüllüktedir.
3. Test Prensibi
Bu hızlı test , tek basamaklı, immunokromotografik yan - akış testidir. Cryptosporidia karşı
yöneltilmiş monoklonal antikorlar kendi kendilerine mavi lateks partiküllere karşı ve Giardia’ ya
karşı yöneltilmiş monoklonal antikorlar ise kırmızı lateks partiküllere bağlanır. Patojenlere karşı
olan diğer spesifik antikorlar membrana sıkıca bağlanır. Gaita numunesi ekstraksiyon bufer
içinde önce asılı kalır sonra çöker. Üzerinde kalan süpernatant kasetin üzerindeki yuvarlağa
damlatılır ve numune ilerler. Numune renkli partiküllerle içeri geçer test pozitif ise membran
boyunca özel toplama bantlarında antijenler bağlanır.Test pozitif ise Mavi ve /veya bantlar
oluşur.
4.
Sağlanan Reaktifler
Pakette 20 teste yetecek kadar reaktif bulunur.
Kaset
20 Test
20 test için 20 ayrı kaset
Diluent
30 ml
Ekstraksiyon bufer, kullanıma hazır.
% 0.1 sodyum azid içerir.
Pipet
25 adet.
25 tek kullanımlık pipet
5.
Saklama Bilgileri
Paket üzerinde yazan tarihi kadar 2 – 30 °C de saklanır. Miadı geçtikten sonra kalite garantisi
geçerli değildir. Benzer olarak her bir kasetin dış paketi zarar görmüş ise test garantisi kalmaz.
6. Gerekli malzemeler, fakat sağlanmayanlar
- Gaita süspansiyonu için test tüpleri
- Tüpler (Opsiyonel: kaplanmamış kuyucuklar)
- Vorteks mikser (opsiyonel)
- Mikropipet (200 μl - 1000 μl)
- % 0.5 sodyum hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
3
7. Kullanıcılar için önlemler
Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir.
Mutlaka eğitimli bir personel tarafından kullanılmalıdır.Medikal laboratuvar çalışanları için olan
rehber takip edilmeli ve oradaki direktiflere tamamen uyulmalıdır.Numune dilüsyonu için olan
bufer, koruyucu olarak sodyum azid içerir.Bu madde deriye ya da mukoz membrana
temasından sakınılmalıdır.
Numuneler ya da reaktifler ağız ile pipetlenmemeli ve yaralı deriyle, mukoz membran ile teması
önlemelidir. Numuneler , eldiven giyilerek çalışılmalı ve test bittiği zaman eller yıkanmalıdır.
Numuneler veya reaktifler ile çalışırken sigara içmeyiniz, yemek yiyip içmeyiniz. Tüm reaktifler
ve metaryaller enfekte bir malzemeye dönüşür. Aynı numuneler davranıldığı gibi uygun bir
dezenfektan ile dezenfekte edilmelidir.(Örn: Sodyum hipoklorit) ya da 121 °C’de en az bir saat
otoklavda bekletiniz.
8. Numune toplama ve saklama
Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan
önce 2 – 8 °C de bekletilmelidir.Eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler –20
°C’de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen
çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır.
Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için , yeteri kadar gaita (yaklaşık 50 mg) alındığından emin
olunuz.
8. Numune toplama ve saklama
Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan
önce 2 – 8 °C de bekletilmelidir.Eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler –20
°C’de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen
çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır.
Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için , yeteri kadar gaita (yaklaşık 50 mg) alındığından emin
olunuz.
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
4
9. Test Prosedürü
9.1. Genel bilgi
Numuneler çalışılmadan önce ekstraksiyon bufer ve test kasetleri (20 – 25 °C) oda sıcaklığına
getirilmelidir. Kasetler çalışmadan hemen önce paketinden çıkarılmalıdır. Bir kere kullanılan
kasetler tekrar kullanılmamalıdır. Kalan reaktifleri geri kutusuna dökmeyiniz, kontaminasyona
sebep olabilir.
9.2. Numune hazırlama
Belirlenen test tüplerine ekstraksiyon buferı 1ml olarak koyun. Sıvı gaita ise tek kullanımlık
pipet ile 100 μl tüpün içine bırakınız. Katı ise buferın içine 50 mg bırakınız. Numune iyice
homojen hale getirilmelidir. Bu da pipetle çekip bırakılarak ya da alternatif olarak vorteks mikser
ile karıştırılarak olur. Bundan sonra, homojen hale gelen numunenin 3 dk kadar çökmesi için
bekleyin. Üzerinde kalan temiz süpernatanttan en az 200 µl en çok 500µl temiz bir tüpe transfer
edin. (ya da kaplanmamış kuyucuğa)
9.3. Numuneyi test etme
Test kasetini paketinden çıkarın , düz bir yüzeye bırakın.200 µl süpernatanttan ya da 4 damla
tek kullanımlık pipet Pipet ile yuvarlağın içine damlatın. Sıvının membranda aktığından emin
olun. Partiküller tıkayabilir, varsa alınmalıdır. Test 5 dakika sonra okunmalıdır.
10. Kalite kontrol – reaktifin miadı
Süspansiyon eklenmeden önce kasetin sağlam olup olmadığı ,renk değişimi olup olmadığına
bakılmalı.Buna ilave olarak , test inkübasyonundan sonra en azından yeşil kontrol bantı
görülmelidir.Görülmez ise testi tekrar etmeden önce aşağıdakiler kontrol edilmelidir.
•
Test kasetlerinin ve kullanılan ekstraksiyon buferın miadı kontrol edilmelidir.
•
Test prosedürünü kontrol edin
•
Ekstraksiyon buferın kontamine olup olmadığı
Bunlardan emin olduktan sonra, yeni kaset ile testi tekrar ettiğinizde , eğer kontrol bandı
görünür değilse, lütfen üretici ya da R-Biopharm distirübütörü ile kontak kurunuz.
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
5
11. Değerlendirme ve yorumlama
Maksimum sırasıyla aşağıdaki 3 band görülür: bir mavi(T1=test bandı 1) , bir kırmızı (T2=test
bandı 2)ve bir yeşil (C = kontrol band) band. Eğer yeşil band yoksa test geçersizdir,
değerlendirilemez!
Aşağıdaki olası yorumlar mümkündür:
- Cryptosporidien pozitif : mavi ve yeşil band görülür.
- Giardia pozitif : kırmızı ve yeşil band görülür.
- Cryptosporidium ve Giardia pozitif : mavi, kırmızı ve yeşil oluşur.
- Negatif: yalnızca yeşil band görülür.
- Geçersiz:Hiçbir band görülmez ya da yukarıda tariflenen kombinasyondan farklı olursa.
Banttaki renk değişimi 10 dakika ya da daha sonra olursa bir anlam ifade etmez ve
değerlendirilmez.
12. Metod Limitleri
RIDA®QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi testi gaitadaki Cryptosporidium parvum ve/veya
Giardia lamblia patojenlerini eder.Test spesifik görünür bantların şiddeti ile klinik semptomların
şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır.
Pozitif sonuçlar, diğer bulaşıcı patojenlerin olmadığı anlamına gelmez.
Negatif sonuçlar Cryptosporidium parvum ve Giardia lamblia enfeksiyonu olduğunu yok
saymaz. Bu enfeksiyon aralıklı olarak salgılanan patojenler ya da numune olan çok küçük
miktardaki patojenler tarafından olabilir.Eğer hasta anemik ya da Cryptosporidium parvum ve
Giardia lamblia tarafından enfekte olduğu şüphesi varsa 4 hafta sonra bir gaita numunesi
alınarak test tekrar edilmelidir. Fazla gaita numunesi, spesifik band renklerinin oluşacağına
kahve rengin oluşmasına sebep olur. Bu kahve renkli bantların bir anlamı yoktur. Bu gibi
durumlarda, daha az miktarda gaita ile testi tekrar etmek gerekli olacaktır. Ya da daha önce
hazırlanan süspansiyon dilüe edilir (temiz süpernatant oluştuktan sonra) çok fazla gaita
tarafından sonucun maskelenmesi önlenip patojen bakterinin varlığı aranır.
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
6
13. Performans nitelikleri
13.1 Klinik karşılaştırma çalışması
Rutin laboratuvar çalışmalarında , RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi metodu ile
mikroskopi metodu donmuş ve taze numunelerde yapıldı. Toplam 70 numune kullanıldı.(15
Cryptosporidium pozitif,15 Giardia lamblia pozitif ve 40 negatif numune). Sonuçlar Talo1 ve
Tablo 2 dedir.
Tablo 1:RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi ile mikroskopinin karşılaştırılması,
Cryptosporidium bandı ile birlikte değerlendirme
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
+
+
14
1
Mikroskopi
-
0
Hassasiyet: 93.8 %
Özgüllük: 100.0 %
40
pos. prognosis değer:
neg. prognosis değer :
100.0 %
97.5 %
Tablo 2: RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi ile mikroskopinin karşılaştırılması
Giardia-bandı ile birlikte değerlendirme
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
+
+
15
0
Mikroskopi
Hassasiyet:
Özgüllük :
2
100.0 %
95.2 %
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
38
pos. prognosis değer:
neg. prognosis değer :
04-11-18
88.2 %
100.0 %
7
13.2. Çapraz reaksiyonlar
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi testi aşağıdaki parazitlerle çapraz reaksiyon
vermemiştir:
Entamoeba coli
Blastocystis hominis
Jodamoeba buetschlii
Chilomastix mesnili
Endolimax nana
Eggs of Taenia spp.
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
8
Referanslar
1. Black, R. E. et al.: Giardiasis in day-care centers: Evidence of person-to-person
transmission. Pediatrics 60 (No. 4), 486 - 491 (1977).
2. Craun, G. F.: Waterborne Giardiasis in the United States: A review. Am. J. Pub. Health 69
(No. 8), 817 - 819 (1979).
3. Nask, T. E. et al.: Experimental human infections with Giardia lamblia. J. Infect. Dis. 156
(No. 6), 974 - 984 (1987).
4. Smith, H. V. et al.: Giardia and Giardiasis: What's in a name? Microbiol. Eur. 3 (No. 1), 22
- 29 (1995).
5. Thompson, R. C. A., Reynoldson, J. A.: Giardia and Giardiasis. Adv. Parasitol. 32, 71 –
160 (1993)
6. Xiao, L.: Giardia infection in farm animals. Parasitology today 10 (No. 11), 436 - 438
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
(1994).
Schunk, M. et al.: Detection of Giardia lamblia and Entamoeba histolytica in stool samples
by two enzyme immunoassays. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20, 389 – 391 (2001)
Clavel, A.: Evaluation of the optimal number of fecal specimens in the diagnosis of
cryptosporidiosis in AIDS and immunocompetent patients. Eur. Journal Clin. Microbiol.
Infect. Dis. 14, 46-49 (1995).
Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clinics in Laboratory Medicine 11 (No. 4),
873 - 895 (1991).
Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clin. Microbiol. Rev. 4 (No. 3), 325 - 358
(1991).
Flanigan, T. P.: Human immunodeficiency virus infection and cryptosporidiosis: Protective
immune responses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 50 (5) Suppl., 29 - 35 (1994).
Guarino, A. et al.: Human intestinal cryptosporidiosis: secretory diarrhea and enterotoxic
activity in Caco-2 cells. J. Infect. Dis. 171, 976 - 983 (1995).
Hayes, E. B. et al.: Large community outbreak of cryptosporidiosis due to contamination of
a filtered public water supply. New. Engl. J. Med. 320 (No. 21), 1372 - 1376 (1989).
Le Chevallier, M. W. et al.: Giardia and Cryptosporidium spp. in filtered drinking water
supplies. Appl. Environ. Microbiol. 57 (No. 9), 2617 - 2621 (1991).
Mc. Anulty, J. M. et al.: A community wide outbreak of cryptosporidiosis associated with
swimming at a wave pool. Jama 272 (No. 20), 1597 - 1600 (1994).
RIDA® Quick Cryptosporidium/Giardia Combi
04-11-18
9