(Spodoptera littoralis) Asetilkolinesteraz Geni cDNA`sının Eldesi

PH–010
Pamuk Yaprak Kurdunun (Spodoptera littoralis)
Asetilkolinesteraz Geni cDNA’sının Eldesi
Banu Avcıoğlu-Dündar, Oktay Gürkan
Bitki Koruma Bölümü, Ziraat Fakültesi, Ankara Üniversitesi
banuavcioglu@yahoo.com; gurkan@agri.ankara.edu.tr
Amaç: Böceklerdeki asetilkolinesteraz (AChE, EC 3.1.1.7), tarımda kullanılan böcek öldürücü
kimyasalların hedef aldığı en başta gelen enzimlerden biridir. Bu çalışmada, önemli bir bitki
zararlısı olan pamuk yaprak kurduna (Spodoptera littoralis) ait asetilkolinesteraz geninin (Ace)
cDNA’sının elde edilmesi amaçlanmıştır.
Gereçler ve Yöntemler: S. littoralis’e akraba türlerin ace genine ait parçalar kullanılarak iki çift
dejenere primer tasarlanmıştır. Uygun laboratuar koşullarında yetiştirilen S. littoralis larvalarından
TRIzol yöntemine göre total RNA izole edilmiş ve ters transkriptaz kullanılarak cDNA’ya
çevrilmiştir. Çeşitli PCR yöntemleriyle elde edilen ve agaroz jelden kesilen PCR ürün bantları,
pGEMT-Easy vektörüne klonlanarak dizi analizi yapılmıştır.
Bulgular: S. littoralis’in NCBI veri tabanında yer alan Lepidoptera ailesine ait Ace dizileri içinde
en yakın akraba Ace dizileri filogenetik açıdan karşılaştırılmış ve Helicoverpa armigera, H.assulta,
Spodoptera litura ve S.exigua kullanılarak korunmuş bölgelere dejenere primerler tasarlanmıştır.
Çeşitli PCR koşullarında her iki çift primerle denemeler yapılmıştır. Beklenilen boyda PCR ürünleri
elde edilmiş ve jelden kesilerek klonlanmıştır. Birkaç DNA dizi analizi tepkimesi sonucunda elde
edilen diziler incelenerek ve birleştirilerek 1072 baz çifti (bç) boyunda cDNA parçasının dizisi
oluşturulmuştur. Bu dizinin, tip 1 Ace genine (Ace1) ait olduğu ve aminoasit dizisinde “stop”
kodonu olmadığı anlaşılmıştır. Dizi, diğer Spodoptera ve Helicoverpa türleriyle DNA düzeyinde
%98-85 arasında, protein düzeyinde ise %99-96 arasında benzerlik göstermektedir. Ayrıca, Ace1 ve
Ace2 genlerinin korunmuş bölgelerini de içermektedir.
Sonuç ve Tartışma: S. littoralis’in Ace geni cDNA’sının 1072 bç’den oluşan bölümü elde edilmiş
ve literatürle karşılaştırıldığında tip 1 Ace grubuna girdiği görülmüştür. Bunun başlıca nedeni,
çoğunlukla Ace1 genlerine ait dizilerinin veri tabanlarında bulunması ve primerlerin bunlara göre
tasarlanmış olmasıdır. Bu çalışmadan daha sonra NCBI veri tabanına girilen 789 bç bir sekansın
(JF773584.1), bu çalışmada elde edilen 1072 bç sekansın içinde yer aldığı görülmüştür.
Anahtar Kelimeler: Pamuk yaprak kurdu, Spodoptera littoralis, asetilkolinesteraz, Ace1 cDNA
Teşekkür: Bu çalışma, “TÜBİTAK 2218 Yurt İçi Doktora Sonrası Araştırma Burs Programı”
tarafından desteklenmiştir.
1326
21. Ulusal Biyoloji Kongresi, 03–07 Eylül 2012, Ege Üniversitesi, İzmir, Türkiye
http://www.ubk2012.ege.edu.tr