Metamfetamin Mikrolevha EIA Oral Sıvı Uygulaması

COZART
Reaktif Maddeler
Metamfetamin
Mikrolevha EIA
Oral Sıvı Uygulaması
Cozart RapiScan Toplayıcısı
M220R5 (Mayıs 2003)
Amaçlanan Kullanım
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Metamfetamin EIA seti
klinik ve adli laboratuarlarda kullanım için Cozart
RapiScan Oral Sıvı toplama sistemiyle birlikte kullanılmak
üzeredir. Bu toplama sistemiyle 15 ng/mL’lik kesme
konsantrasyonunda insan ağzı sıvısındaki Metamfetamin ve
metabolitlerinin takibi için niteliksel sonuçlar sağlar.
Toplama sistemi örneğin 1:3’lük seyreltilmesini
içerdiğinden, bu seyreltilmemiş insan ağzı sıvısındaki 45
ng/mL’ye eşittir.
Bu belgenin geri kalanı 15 ng/mL’lik kesme
konsantrasyonundan bahsedecektir.
Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar.
Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç
alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında
klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya
başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde
etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi
kullanılmalıdır.
Gaz
kromatografisi/kütle
spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme
yöntemidir.
Bu ürünün işyeri testi için gerekli kriterleri sağladığını
belirlemek organizasyonların sorumluluğudur.
«
M220R5 - 5 tabaklı set
Anti-Metamfetamin Kaplı Levha- (5 levha)
Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit. Kuru formdaki
polistiren levha üzerinde sabitlenmiş antiMetamfetamin tek klon fare antikorları. Serbest BSE
kaynağından elde edilen BSA 0.001% içerir.
Enzim Eşleniği – (55 mL)
Yaban turpu peroksidazıyla <0.1% (v/v) etiketlenmiş
ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş
Metamfetamin türevi.
Koruyucular içerir.
Yıkama Tampon Çözeltisi – (50 mL)
30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde.
Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf
suyla seyreltin.
Substrat Çözeltisi—(55 mL)
<0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir şişe.
Durdurma Çözeltisi—(55 mL)
1 mol/L sülfürik asit içeren bir şişe.
aşındırıcı olarak kullanın.
Bu çözeltiyi
Negatif Kalibratör – (2 mL)
Metamfetamin için negatif oral sıvı matrisi.
Pozitif Kalibratörler – (bütün seviyelerde 2 mL)
15 ng/mL Metamfetamin içeren oral sıvı matrisi.
50 ng/mL Metamfetamin içeren oral sıvı matrisi.
500 ng/mL Metamfetamin içeren oral sıvı matrisi.
Testin Prensibi
Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Metamfetamin EIA seti
insan ağzı sıvısındaki metamfetaminin tespiti için rekabetçi
bir enzim immunotahlilidir.
Mikrotitre şeritlerinin
çukurları anti-Metamfetamin antikorlarıyla kaplıdır. İlk
kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP)
etiketlenmiş Metamfetamin, mikrotitre şeritlerindeki antiMetamfetamin antikorlarının bağlanma yerleri için hasta
örneğindeki serbest Metamfetamin ile yarışır.
TMB
substrat çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla
enzim materyalinin kaldırılması için yıkanır. Durdurma
çözeltisinin
eklenmesi
tepkimeyi
durdurur
ve
soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de
okunur.
Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta
saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen
son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır.
Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu
mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir.
Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık
tahlil performansını olumsuz etkileyebilir.
Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir.
Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer
edildiğinden emin olun.
Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi
renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini
gösterir. Substratı ışığa maruz bırakmayınız.
Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme,
bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır.
1
Methamphetamine (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Örnek Toplanması ve Saklanması
Lütfen Cozart RapiScan Toplayıcısıyla örnek toplama
prosedürünü anlatan talimatlara (CD101) başvurunuz.
Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C
sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20°C sıcaklıkta
saklayınız. Örneğin kirlenmesinden şüpheleniliyorsa yeni
bir örnek elde ediniz.
Oral sıvı örneğinin toplanmasından önce yiyecek veya
içecek tükettiğinizde 10 dakika bekleyiniz.
Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini
düşünerek kullanınız.
Uyarılar ve Önlemler
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin
bulundurulması tavsiye edilmez.
Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun
şekilde korunmalıdır.
Kalibratörler
sentetik
oral
sıvı
kullanılarak
hazırlanmıştır. Ancak, kalibratörler ve bütün oral sıvı
örnekleri potansiyel olarak enfekte oldukları
düşünülerek kullanılmalıdır.
Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru
tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak
patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum
azid içerir. Bu reaktifleri elden çıkarırken azid
birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda
suyla yıkayınız.
Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız.
Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz.
Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları
kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz.
Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra
kullanmayınız.
Farklı
setlerden,
üreticilerden
veya
parti
numaralarından reaktifleri karıştırmayınız.
Reaktifleri dondurmayınız.
Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan
günışığından uzak tutulması tavsiye edilir.
Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız.
Örnek eklenmesi 30 dakikadan fazla sürmemelidir.
Prosedür
Tahlil Prosedürü
Yıkama Tamponunu 1:30 oranında saf suyla
seyrelterek hazırlayınız.
Not:
Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda
sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün
takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler,
kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test
edilebilir.
2
1.
25 dakika içinde her çukura örneğin, kalibratörün
veya kontrolün 25 µL’sini ekleyiniz. (Yukarıdaki
not 13’ye bakınız.)
2.
Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz.
3.
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
4.
Levhayı levha yıkayıcısını kullanarak 350 µL
Methamphetamine (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Yıkama Tampon Çözeltisiyle dört kere yıkayınız.
Yetersizlikler
5.
Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
6.
Her çukura 100 µL Durdurma Çözeltisi ekleyiniz.
Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka
bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla
kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan oral sıvısıyla
kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
7.
450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.
Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Pozitif ve negatif kontroller.
450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu.
Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi
önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız.
Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel
mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama
tamponu çözeltisini dağıtmak için 350μL sekiz kanallı
pipet.
30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer.
Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için
temiz ölçme silindiri.
Saf veya iyonsuzlaştırılmış su.
Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin
testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi
yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır.
Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma
sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart
Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Kalite Kontrol
Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş
tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır.
Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış
kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara
uymalıdırlar. Negatif kontrol, 15ng/mL kalibratörden daha
yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol,
15ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip
olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 15ng/mL
kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip
değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir.
Tahlil tekrar
edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen
limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd.’in Teknik
Servis’i ile temasa geçiniz.
Sonuçların Değerlendirilmesi
Pozitif Sonuç – 15ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük
veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif
olarak değerlendirilir.
Negatif Sonuç – 15ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük
soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak
değerlendirilir.
Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere
sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki
talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar,
performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya
ima edilen iddialarını etkileyebilir.
3
Methamphetamine (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
3.
Özgüllük
Çok sayıda ilişkisiz ilaç 10,000 ng/mL'de test edilmiştir.
Hiçbir çapraz tepkirlik gözlenmemiştir. Bu bileşiklerin tam
listesi için lütfen teknik destekle bağlantıya geçiniz.
Tahlilden önce maddeler negatif oral sıvı örneği içinde
hazırlanmıştır.
Her bir örneğin konsantrasyonunu tahmin etmek için dört
kalibratör kullanılarak bir kalibrasyon eğrisi çizilmiştir.
Bileşik
ng/mL
Test
edilen
Görünür
Methamphetam
ine
ng/mL
Çapraz
Tepkirl
ik
10,000
100,00
0
73
0.7
743
0.7
β-Phenethylamine
5,000
10,000
27
61
0.5
0.6
- Ephedrine
10,000
<15
-
+ Ephedrine
10,000
<15
-
Phentermine
100,00
0
<15
-
5,000
10,000
20
40
0.4
0.4
MDMA
25
100
500
<15
49
214
49
43
MDEA
100
500
1000
<15
26
48
5
5
MBDB
25
39
154
100
147
147
D-Amphetamine
MDA
D.Simpson et al.
Screening for drugs of abuse (II): cannabinoids,
lysergic
acid
diethylamide,
buprenorphine,
barbiturates, benzodiazepines and other drugs. Ann
Clin Biochem (1997); 34 : 460-510.
Daha fazla bilgi için:
COZART Bioscience Ltd
45 Milton Park,
Abingdon,
Oxfordshire,
OX14 4RU, UK.
Telefon: +44 (0) 1235 861483
Faks: +44 (0) 1235 835607
www.cozart.co.uk
Bibliografi
1.
2.
Urine Testing for Drug of Abuse. National Institute
on Drug Abuse (NIDA) Research Monograph 73,
1986.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug
Testing Programs. National Institute on Drug Abuse.
Federal Register Vol. 53, No 69 pp 11970 (1988).
4
Methamphetamine (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.