M245B1/5 Türkçe Cozart® EIA Opiatlar Adli SetiSadece tüpte teşhis kullanımı içindir. Amaçlanan Kullanım Serum ve bütün kan için Cozart Opiatlar EIA seti klinik ve adli laboratuarlarda kullanım içindir. İnsan serumu ve bütün kanındaki Opiatlar için 100ng/mL’lik kesme konsantrasyonunda niteliksel sonuçlar sağlar. Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar. Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi kullanılmalıdır. Gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme yöntemidir. Adli kan örneklerinin rutin analizi için örneklerin saf suyla 5'te 1 oranında sayreltilmesi tavsiye edilir. Örneğin, 200µL su eklenmiş 50µL kan. Daha fazla yardım için lütfen teknik destek ile temasa geçin. Testin Prensibi Cozart® EIA Opiatlar Adli Seti, insan serumu ve bütün kanında opiatların tespiti için rekabetçi bir enzim immunotahlilidir. Mikrotitre şeritlerinin çukurları anti-opiat antikorlarıyla kaplıdır.İlk kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP) etiketlenmiş opiatlar, mikrotitre şeritlerindeki antiopiatlar antikorlarının bağlanma yerleri için hasta örneğindeki serbest opiatlar ile yarışır. 0 TMB substrat çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim materyalinin kaldırılması için yıkanır. Durdurma çözeltisinin eklenmesi tepkimeyi durdurur ve soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de okunur. 1 Reaktif Maddeler M245B1- 1 tabaklı set (M245B5- 5 tabaklı set) Anti-Opiat Kaplı Levha- 1 levha (5 levha) Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit. Kuru formdaki polistiren levha üzerinde sabitlenmiş anti-opiat çok klon antikorlar. 0.001% BSA içerir. Enzim Eşleniği – 15 mL (55mL) Yaban turpu peroksidazıyla <0.1% (v/v) etiketlenmiş ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş opiat türevi. Koruyucular içerir. Yıkama tampon çözeltisi – 50ml (50ml) 30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde. Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf suyla seyreltin. Substrat Çözeltisi– 20 mL (55mL) <0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir şişe. Durdurucu çözelti– 20 mL (55mL) 1 mol/L sülfürik asit içeren bir şişe. Bu çözeltiyi aşındırıcı olarak kullanın. Negatif Kalibratör - 1mL (4mL) Opiatlar için negatif protein matris. Pozitif Kalibratörler – bütün seviyelerde 1 mL (bütün seviyelerde 4 mL) 5ng/mL Morfin içeren protein matris 10ng/mL Morfin içeren protein matris 100ng/mL Morfin içeren protein matris 500ng/mL Morfin içeren protein matris Koruyucular içerir. 2 Uyarılar ve Önlemler 1. 2. 3. Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin bulundurulması tavsiye edilmez. Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun şekilde korunmalıdır. Bütün reaktiflerin düzgün kullanılması önemle tavsiye edilir. Substrat Çözeltinin kirlenmesini önlemek için tek kullanımlık materyallerin kullanılması önerilir.Belirgin mavi rengin ortaya çıkması durumunda substrat çözeltisini atın. Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum azid içerir.Bu reaktifleri elden çıkarırken azid birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda suyla yıkayınız. 5. Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız. 6. Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz. 7. Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz. 8. Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra kullanmayınız. 9. Farklı setlerden, üreticilerden veya parti numaralarından reaktifleri karıştırmayınız. 10. Reaktifleri dondurmayınız. 11. Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan günışığından uzak tutulması tavsiye edilir. 12. Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız. 4. Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller 1. 2. 3. 4. Pozitif ve negatif kontroller. 450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu. Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız. Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama tamponu çözeltisini dağıtmak için 350μL sekiz kanallı pipet. 3 5. 30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer. 6. Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için temiz ölçme silindiri. 7. Saf veya iyonsuzlaştırılmış su. Örnek Toplanması ve Saklanması Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20°C sıcaklıkta saklayın. Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini düşünerek kullanınız. Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır. Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir. Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık tahlil performansını olumsuz etkileyebilir. Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir. Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer edildiğinden emin olun. Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini gösterir.Substratı ışığa maruz bırakmayınız. Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme, bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır. Prosedür Tahlil Prosedürü 4 Not: Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler, kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test edilebilir. 1. Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 25 µL’sini 25 dakika içinde ekleyiniz. 2. Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz 3. 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 4. Levhayı 350µL yıkama tampon çözeltisiyle ve levha yıkayıcısıyla dört kere yıkayınız. 5. Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 6. Her çukura 100 µL Durdurucu Çözelti ekleyiniz. 7. 450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün. Kalite Kontrol Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır. Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara uymalıdırlar.Negatif kontrol, 100ng/mL kalibratörden daha yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol, 100ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 100ng/mL kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir. Tahlil tekrar edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd.’in Teknik Servis’i ile temasa geçiniz. 5 Sonuçların Değerlendirilmesi Pozitif Sonuç – 100ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif olarak değerlendirilir. Pozitif bir sonuç, zehirlenme (entoksikasyon) derecesi veya uyuşturucu miktarı hakkında bir bilgi sağlamaz; sadece niteliksel olarak örneğin kesme seviyesinin üzerinde uyuşturucu bulundurabileceğine işaret eder. Negatif Sonuç – 100ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak değerlendirilir. Negatif bir sonuç kesin olarak örnekte uyuşturucu madde bulunmadığına işaret etmez; sadece örneğin niteliksel olarak kesme seviyesi üzerinde uyuşturucu bulundurmadığına işaret eder. Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar, performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya ima edilen iddialarını etkileyebilir. Yetersizlikler Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan serumu ve bütün kanıyla kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır. Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa geçiniz. 6 Özgüllük 100,000 ng/mL’de çapraz tepkimeyenler, kesme konsantrasyonuna göre 7-Aminoflunitrazepam Alprazolam Amitriptyline Amobarbital Amphetamine Anhydroecgonine Anhydroecgonine methyl ester Ascorbic Acid Aspirin Benzoylecgonine Buprenorphine Butalbarbital Caffeine Cannabidiol Chlordiazepoxide Chloroquine Chlorpheniramine Clonazepam Cocaethylene Cocaine Cotinine Δ9-THC Desalkylflurazepam Desmethylflunitrazepam Diazepam Dothiepin Ecgonine methyl ester EDDP EMDP (-) Ephedrine (+) Ephedrine Fenfluramine Fentanyl Flunitrazepam Fluoxetine Hexobarbital 3-Hydroxyflunitrazepam 11-HydroxyΔ9-THC Ibuprofen Ketamine LAAM Lidocaine Lorazepam LSD MBDB MDA MDEA MDMA Methadone Methamphetamine Midazolam Naloxone Nicotine 11-nor-9-Carboxy-Δ9-THC 7 Nitrazepam Norbuprenorphine Nordiazepam Norfluoxetine Nor-LSD Oxazepam Paracetamol Pentobarbital Phencyclidine Pheniramine Phenobarbital βPhenylethylamine Phentermine Phenylpropanolamine Prazepam Propoxyphene Propranolol (-) Pseudoephedrine (+) Pseudoephedrine Ranitidine Salicylate Secobarbital Temazepam Triazolam Tyramine Warfarin Çapraz-Tepkiyenler Bileşikler Çapraz-Tepkiyenler 6-Acetyl Morphine Codeine Dextromethorphan Dihydrocodeine Heroin Hydrocodone Hydromorphone Meperidine ng/mL 100,000 1,000 500 100 10 100 10 5 100,000 10,000 500 100 10 5 500 100 10 5 500 100 10 5 100,000 1,000 500 100 10 5 100,000 10,000 1,000 500 8 Görülen Morfin ng/mL % Tepkirlik > 500 290.0 116.3 22.8 <5 > 500 104.4 45.1 115.0 6.1 > 500 419.2 45.2 20.0 > 500 170.2 17.8 8.2 > 500 313.4 38.9 20.4 > 500 452.5 291.5 50.4 7.1 <5 291.0 27.5 5.3 <5 --29.0% 23.3% 22.8% ----1044% 903% 0.12% 0.06% --419% 452% 400% --170% 178% 164% --313% 389% 408% --45.3% 58.3% 50.4% 71.0% --0.29% 0.27% 0.53% --- Bileşikler Çapraz-Tepkiyenler Morphine-3-Glucuronide Nalorphine Norcodeine Normorphine Oxycodone Oxymorphone ng/mL Görülen Morfin ng/mL % Tepkirlik 100,000 1,000 500 100 10 100,000 10,000 10 100,000 1,000 500 100 10 100,000 10,000 1,000 100,000 1,000 500 100 10 100,000 1,000 100 > 500 86.3 47.7 12.3 <5 283.0 28.9 <5 > 500 31.6 20.7 6.7 <5 > 500 55.1 <5 > 500 40.3 24.8 6.9 <5 > 500 8.2 <5 --8.6% 9.5% 12.3% --0.29% 0.29% ----3.2% 4.1% 6.7% ----0.55% ----4.0% 5.0% 6.9% ----0.82% --- Daha fazla yardım/teknik destek için: COZART plc 92 Milton Park Abingdon Oxfordshire 9 OX14 4RY, UK Telephone: +44 (0) 1235 861483 Fax: +44 (0) 1235 835607 info@cozart.biz techsupport@cozart.biz www.cozart.biz 10