COLİCÎN N TOXÎNİNİN JE. Coli MEMBRANTNDAN GEÇİŞ

XIV. Ulusal Kimya Kongresi, Diyarbakır, 2000
BK-S17
C O L İC ÎN N T O X ÎN İN İN JE. Coli MEMBRANTNDAN G EÇ İŞ
M EK A N İZM A SI
İsa GÖKÇE*. L. G. DOVER**, Jeremy H. LAKEY***
* Gaziosmanpaşa Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Kimya bölümü TOKAT
** Newcastle Upon Tyne University Faculty o f Medicine School o f Microbiological
and Virological sciences NE24HH NEWCASTLE UPON TYNE ENGLAND
*** Newcastle upon Tyne University Faculty o f Medicine School ofBiochemistry
and Genetics NE24HTI NEWCASTLE UPON TYNE ENGLAND
Coiicin N bakterilerde por oluşturan ve üç domeinden (kısımdan) ibaret bir
toxindir. Coiicin N, E. Coli gibi bakterilerin üzerlerindeki reseptörlere bağlanarak
ve bunu müteakiben peripiazmadaki birçok proteinlerle etkileşerek öldürür.
Bu toxin ilk önce Gram negatif bakterinin dış membranındaki OmpF (dış membran
proteini F) gibi yüzey reseptörlerine merkezdeki domaini ile bağlanır, daha sonrada
N terminal ucu ilede TolA veya TonB gibi perİplazmik proteinlerle etkileşir, son
oiarakta öldürücü C terminal ucu ile de stoplazmik membrana geçer ve burada por
oluşturarak hücreyi Öldürür.
Bu çalışmada Coiicin N in bakteri membranmdan içeri geçerken herhangi bir
konformasyonal değişikliğe uğrayıp uğramadığı incelendi. Bunun İçin Coîicin N
proteinin içerisinde konformasyonunu daha kuvvetlendirmek üzere disulfıt bağlan
oluşturacak şekilde bazı amino asitleri sisteinle değiştirdik. Bu mutasyonlar için
°QuikChange site directed mutagenesis” metodunu kullandık.
Mutant proteinleri E. Coli bakterisinde üretip saflaştırdıktan sonra bu proteinleri
fuloresans spektrofotometresi, DTT (dithiothreitol) ve ANS (8-anilino-înaphtalenesulfonic acid) floresant probu kullanılarak Coiicin N in hücre
membranmdan geçiş mekanizması incelendi.
Disulfıt bağı oluşturmuş mutant Coiicin N proteinleri E. Coli bakterisini
öîdüremedi. Bakteriler bu protein içerisinde oluşturulan disulfıt bağının DTT ile
kırılması ile Coiicin N tarafından öldürüldü. Bu mekanizma Floresans
spektrofotometresinde DTT, ANS probunun ve tripsin enziminin kullanılması ile
incelendi.
84