real tıme pcr unıversal master mđks
advertisement
REAL TIME PCR UNIVERSAL MASTER MĐKS - 1X TAVSĐYE EDĐLEN PCR PROGRAMI(*) KATALOG NUMARALARI SNPRTM01 (10 TEST) SNPRTM05 (50 TEST) GĐRĐŞ 95 °C 10 dk. 95 °C 15 sn. 60 °C 1 dk. 35 döngü Real Time PCR Universal master miks, içerisinde primer ve prob hariç bir PCR reaksiyonun gerektirdiği tüm bileşenler olan 10X PCR Buffer, (*) Çalışmaya göre değişebilir MgCl2, dNTP ve su bulundurur. Primer ve prob, bölgeye özgüdür ve kullanıcı tarafından eklenmelidir. Reaksiyon için gerekli olan Hot Start TEST PROSEDÜRÜ Taq DNA polimeraz da miks ile bilrlikte verilmektedir. Universal PCR Master Miks, kullanıma hazır bir mikstir. Ancak, primere ve proba özgü optimizasyon gerektirebilir. Standart bir reaksiyon içeriği aşağıda belirtilmiştir. Kullanılacak olan PCR programı primerler ile ilişkili olması nedeniyle kullanıcı tarafından tekrar optimize edilebilir. MĐKS PRENSĐBĐ PCR esnasında enzim aktivitesi ile birlikte reporter ve quencer arasında bulunan prob parçalanarak ayrılır ve reporter boya üzerindeki Universal Master Miks 19,5 µl baskılanmanın ortadan kalkmasıyla ışıma meydana gelir. Bu işlem Primer F (10 pmol) * µl sadece hedef bölge üzerinde hibridize olmuş problarda gerçekleşir. Primer R (10 pmol) * µl Amplifikasyon miktarı arttıkça, Prob (5 pmol) * µl birlikte ışıma doğrusal olarak artmakta ve bu artış cihaz tarafından eş- Hot start taq DNA Polimeraz 0.2 µl zamanlı olarak tespit edilmektedir. Bu miks prop içermeyen diğer real DNA ** time PCR (Syber Green-Scorpion gibi) çalışmaları için de güvenle PCR Grade Su kullanılabilir ------------------------------------------------------- reporter boyanın açığa çıkmasıyla (Toplamda 100 - 150 ng) 25 µl’ye tamamlayın Toplam Miktar 25 µl ÜRÜN ĐÇERĐĞĐ Bileşen • Real Time PCR Universal Master Miks (1X) • Enzim • PCR Grade Su 10 Test 200 µl 6 µl 100 µl (*) Primer ve prob konsantrasyonuna göre değişebilir. (**) DNA miktarı (µl de kaç ng olduğu) izolasyon yöntemine göre farklılıklar gösterebilmektedir. Bu nedenle ng cinsinden bahsedilen miktara eşdeğer µl konulması önerilir. UYARILAR SAKLAMA KOŞULLARI • Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır. • Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma • unutulmuş solüsyonları kullanmayınız. • tarihine kadar kullanılabilir. • Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden Saklama koşullarına uygun olarak saklayınız, oda sıcaklığında Solüsyonlar, baş aşağı edilerek hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir. • olabilir. Belirtilenden fazla miktarda enzim kullanılması sonucu olumsuz etkileyebilmektedir. • Master Miks içeriğinde bulunan tüm solüsyonlar vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece vücut dışı test kiti olarak kullanılır. • Master mikslerin raf ömrü etiket üzerinde Kullanmadan önce üretim tarihine dikkat edilmelidir. Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012 belirtilmiştir.
