Legionella pneumophila Real TM Quant B50-TB50

in Vitro Diagnostik
Kullanım İçin
Legionella pneumophila Real-TM
El Kitabı
Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti
Legionella pneumophila
REF TB50-50FRT
REF B50-50FRT
50
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
ADI
Legionella pneumophila Real-TM
GİRİŞ
Legionella pneumophila, Legionella cinsinden ince, pleomorfik flagellalı gram negatif bakteridir. L.
pneumophila, bu grupta, primer insan patojen bir bakteri olup legionellosis veya Lejyoner
hastalığına neden olan bir ajandır.
(Ölen gazi anısına) Legionella pneumophila dünyada sucul ortamlara her yerde olduğu gibi amip ve
protozoa bir hücre içi parazit olarak doğal çevre ve insan hastalığı arasında bir bağlantı sağlandığı bulunur.
Böylece, çevresel izleme, özellikle içme suyu, soğutma kulelerinde, ve ilgili kaynakların, bu
hastalığın yayılmasını kontrol çabalarında önemli bir odak noktasıdır.
1976 yılında 235 olgunun ilk tanımlama yana, Lejyoner hastalığı hastanede yatan hastalarda atipik
pnömoni en sık nedeni olarak kabul haline gelmiştir. Bu % 25 mortalite ile toplum kökenli bakteriyel
pnömoni olarak ikinci en sık nedenidir.
KULLANIM AMACI
Legionella pneumophila Real-TM kiti klinik materyallerde (balgam, trakea, nazofarengeal
swablar,
boğaz
bezlerinden,
bronkoalveoler
lavajdan
gelen
aspirasyon,
doku),mikroorganizma kültürlerinde Legionella pneumophila DNA Real Time kalitatif tespiti
için, bir testtir ve çevre örneklerinde Legionella pneumophila DNA (su, çevre nesnelerden
gelen yıkantı, biyofilm sıyrıklar, toprak) miktarlandınlması.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
TAHLİL PRENSİBİ
Legionella pneumophila Real TM biyolojik materyallerde ve cevresel örneklerde Legionella
pneumophila kalitatif ve kantitatif tespiti için bir Real Time Amplifikasyon testidir.
Legionella pneumophila Real TM kiti olarak kullanılabilir:
Klinik materyallerde Legionella pneumophila DNA tespiti için kalitatif bir test. Legionella
pneumophila mip-gen, DNA ve protrombin gen DNA testi multipleks real time PCR sırasında
gerçekleştirilir. Protrombin gen DNA endojen iç kontrol olarak kullanılır. Protrombin gen DNA
amplifikasyonu FAM / Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila mip-gen DNA
çoğaltma, JOE / Sarı kanalda algılanır. Protrombin gen DNA insan genomunun DNA parçasıdır ve
DNA örneği (en az 103 den genomları) yeterli miktarda mevcut olmalıdır. Hem yanlış saklama
koşulları ve kötü DNA izolasyonu süreci DNA nın bozulmasına ve kaybına yol açabilir. Yani,
endojen iç kontrol analiz adımlarını kontrol etmenize izin vermez, ama aynı zamanda örnek
işleme ve depolama değerlendirir.
Cevresel numunelerde Legionella pneumophila DNA tespiti için kalitatif bir test. Bu durumda
Internal Kontrol kullanılır. IC DNA amplifikasyonu FAM / Yeşil kanalda tespit edilirken
Legionella pneumophila mip-gen DNA, JOE / Sarı kanalda algılanır.
Suda Legionella pneumophila DNA hesaplamak için kantitatif test. Bu durumda Internal Kontrol
(IC) kullanılır. IC DNA amplifikasyonu FAM/Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella
pneumophila mip-gen DNA, JOE/Sarı kanalda algılanır. Legionella pneumophila ve İç
Kontrol DNA kopya kantitatif ölçmek için standartları kullanılmaktadır.
Su örneklerinde Legionella pneumophila DNA kantitatif için, her numune için ekstraksiyon
prosedürü esas alınarak, iki kere test edilmelidir. Sonuçlar her iki sonuç ortalaması olarak verilmiştir.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
SAĞLANAN MALZEMELER
Modül No.1: Real Time PCR kit (B50-50FRT)
“Kontroller”
Legionella C+, 0,5 ml;
Negative Control C-, 1,2 ml;
Legionella IC, 0,5 ml;
DNA-buffer, 0,5 ml;
Legionella pneumophila Real-TM
PCR-mix-1, 70 tüp;
PCR-mix-2-FL, 0,77 ml;
Standartlar
o QS1, 0,06 ml; o
QS2, 0,06 ml; o
QS3, 0,06 ml
55 test için reaktifler içerir
Modül No.2: DNA purifikasyon kiti (TB50-50FRT) ile complete Real Time PCR testi.
Lysis Solution, 15 ml;
Washing Solution 1, 30 ml;
Washing Solution 2, 50 ml;
Sorbent, 1,25 ml;
DNA-eluent, 5 ml.
50 test için reaktifler içerir
‘’Kontroller’’
Legionella C+, 0,5 ml;
Negative Control C-, 1,2 ml;
Legionella IC, 0,5 ml;
DNA-buffer, 0,5 ml;
Legionella pneumophila Real-TM
PCR-mix-1, 70 tüp;
PCR-mix-2-FL, 0,77 ml;
Standartlar
o QS1, 0,06 ml; o
QS2, 0,06 ml; o
QS3, 0,06 ml
55 test için reaktifler içerir
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
SAĞLANMAYAN GEREKLİ MALZEMELER
Alan 1 : Numune Hazırlama
DNA ekstraksiyon kiti (Modül
No. 1) Biyolojik kabin
Vorteks
65°C ± 2°C kuru ısı bloğu
“eppendorf” tip tüpler için (RCF max. 16,000 x g) masaüstü mikrosantrifüj,
Tüp rakları
Mikrosantrifüj tüpleri, 1,5 - 2,0 ml
Steril, RNase içermeyen filtre uçlu pipetler
Biyolojik atıklar için atık kabı,
Tekk kullanımlık-atılabilir
eldivenler (pudrasız),
Buzdolabı, Dondurucu
Alan 2: Real Time Amplifikasyon
Tek kullanımlık eldiven,
pudrasız Biyolojik tehlike atık
bidonu, Buzdolabı, Dondurucu
Real Time Thermal cycler
Çalışma İstasyonu
Pipetler (ayarlanabilir)
Filtreli steril pipet uçları
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
MUHAFAZA KOŞULLARI
Legionella pneumophila Real-TM kiti 2-8°C de saklayın.Kit 2-25°C de nakliye edilebilir ancak
alındıklarında hemen 2-8°C de saklanmalıdır. DNA-Sorb-B 2-8°C de saklayın.
STABİLİTE
Legionella pneumophila Real-TM etiketinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Ürün
etiketinde basılı kontrol tarihine kadar performansını koruyacaktır . Işık, ısı veya neme maruz kalma
kitin
bazı
bileşenlerinin
raf
ömrünü
etkileyebilir,
bunlardan
kaçınılmalıdır.
Hassasiyet
azalabileceğinden, reaktiflerin tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçınılmalıdır.
Bileşenlerin etiketlerde belirtilen koşulların dışında muhafazası, hatalı çalışmaya neden olabilir ve
tahlil sonuçlarını ölumsuz yönde etkileyebilir.
KALİTE KONTROL
Her lot , tutarlı ürün kalitesini sağlamak için; Sacace ISO 13485-Sertifikalı Kalite Yönetim
Sistemine uygun olarak, önceden belirlenmiş özelliklere karşı test edilmektedir.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
UYARILAR VE ÖNLEMLER
In Vitro Diagnostic Medikal Cihaz
Sadece In Vitro Diagnostic Kullanım için
Kullanıcı her zaman aşağıdakilere dikkat etmelidir:
Lysis Solution ,guanidine thiocyanate* içerir. Guanidin tiyosiyanat solunduğunda veya
yutulduğunda veya deri ile temas halinde zararlıdır. Asit ile temasında toksik gaz oluşturur.
(Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39).
Aeresol bariyerli steril pipet ucuları kullanın ve her prosedür için yeni pipet ucu
kulanın.
Ekstrakte pozitif malzemeleri (numuneler, controller ve amplikonlar) diğer reaktiflerden uzak
tutun/mufaza edin ve bunları reaksiyon karışımına ayrı bir alanda ekleyin.
Bütün bileşenleri tahilile başlamadan önce oda sıcaklığında iyice çözün.
Bileşenler çözündüğünde karıştırın ve kısa bir süre santrifüjleyin.
Reaktif ve örnekler ile çalışırken , atılabilir eldiven, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu kullanın.
İşlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın.
Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi birşey yemeyin- içmeyin, kozmetik
uygulamayın veya kontakt lenslere elle dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri
kullanmayın.
Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri ,yerel yönetim kurallarına uygun olarak imha edin.
.
Örnekler potansiyel enfeksiyöz olabilir , işlemleri uygun biyogüvenlik uygulamaları ile bir güvenlik
kabini içerisinde gerçekleştirin.
Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya
diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin.
Numune veya reaktiflerin deri, göz veya mukoza zarları ile temasından kaçının. Deri, göz veya
mukoza zarları ile temas olması halinde, hemen su ile yıkayın ve acilen tıbbi yardım alın.
Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir.
Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı
olmalıdır.
.
Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon Alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit
alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı
bölgeye/alana geri döndürmeyin.
Bu kitteki bazı bileşenler koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktif transferi için metal
tüp kullanmayın.
* Sadece Modül No.2
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI
Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu
(UNI EN ISO 18113-2:2012).teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım
kılavuzu ile sıkı uyum optimum PCR sonuçları için gereklidir. Kutu ve tüm bileşenlerin etiketleri
üzerinde yazılı olan son kullanım tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanım tarihlerinden sonra
kitleri kullanmayın.
NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA
Legionella pneumophila Real-TM DNA-Sorb-B (Modül No.2 ile birlikte) ile ekstrakte DNA analiz
edilebilir:
Balgam bronchial veya tracheal lavage aşağıdaki prosedüre göre işlenmelidir:
O
Balgam, 50 ml tek kullanımlık , vida kapaklı PP tüplerde toplanır.
O Biyolojk kabinde, % 4 NaOH çözeltisi eşit hacimde
karıştırıldıktan sonra numune homojen hale getirilir.
4% NaOH solution. (gerekirse örnek başına 50-70 mg miktar, N-asetil-L-sistein ilave
edilebilir).
50-70 mg per sample). 5-20 dakika (numune yoğunluğuna bağlı olarak) bir tüp rotator
ile yoğun bir şekilde karıştırılır.
O
Numuneler 3000 rpm (2800-3000g) de 15 dk. santrifüjlenir ve süpernatantı tüpe 500-1000 µl
bırakılarak dikkatlice ayırın. Sedimenti resüspanse edin ve 1.5 ml lik tüpe aktarın.
O
Numuneleri 12000rpm de 5-10 dk. santrifüjleyin , süpernatantı ayırın ve numune
sedimentinden DNA izolasyonu için aynı 1,5 ml'lik numune tüpünü kullanın.
Nazofarenks ve boğaz sürüntüsü: 500 ul steril serum fizyolojik veya fosfat tampon çözeltisi
(PBS) ile tek kullanımlık steril pamuk çubuklu probu çalışma alanını yerleştirin. Probun üst
bölümünü kırın veya tüpün kapanacağı şekilde kesin. Süspansiyonu DNA ekstraksiyon için
kullanın.
Legionella şüpheli Mikroorganizma kültürleri, 0.5 ml tuzlu su çözeltisi ya da fosfat tampon maddesi ile
kültürleri tekrar süspanse edin. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın.
doku (~1,0 gr) neşter, cam çubuklar, teflon havan tokmakları veya mekanik homojiner ile homojenize
edin ve 1,0 ml tuzlu suda yada PBS sterilde ( 1hacim doku-1hacim tuzlu su) çözün. Kuvvetlice
vorteksleyin ve oda sıcaklığında 30 dk. inkübe edin. Süpernatantı yeni bir 1,5 ml'lik tüpe
aktarın.
Su (atık su, su deposu, içme suyu): 0.5 L su cam huni ile kağıt filtre içinden ön filtre edilir. Ön filtre
edildikten sonra su gözenek çapı en fazla 0,45 um membran filtre ile filtrelenir. Filtrasyondan
sonra membran filtre (tek bir Petri kabı), steril makas ile kesilir ve 1 ml tuzlu su çözeltisi ile 1.5
ml tüpler içine steril kıskaçlar ile yerleştirilir. Tüp, 15-20 dakika boyunca oda sıcaklığında
inkube edilir, çözeltide microflora geçişi sağlamak için periodik olarak vorteksleyin. DNA
ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
Çevresel nesnelerden yıkantı, steril tuzlu su çözeltisi içinde, doymuş pamuklu bir prob ile elde edilir.
Çubuklu probun çalışma ucu,1.5 ml tuzlu su çözeltisi ile, tüp içine yerleştirilir, probun diğer bir
parçası kırılmış ve uzağa taşınır. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın.
Su iç yüzeyinden Biyofilm sıyrıklar, sanayi ve diğer ekipmanlar (örneğin, klimaların iç tepsisinden)
Scrapes of moist biofilms under water or on the water-air interface are obtained by dry sterile
probe and scrapes of dried biofilms are obtained by swab, saturated in sterile saline solution.
Çubuklu probun çalışma ucu, 0.5 ml tuzlu su çözeltisi ile 1.5 ml lik tüp içine yerleştirilir, probun
diğer bir parçası kırılmış ve uzağa taşınır. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın.
Zemin (100 g): (0,4-1,0 gr) zemini sıkıca kapalı kapaklı 5 ml tüplere aktarın. Her tüpe 3 ml
tuzlu su çözeltisi ekleyin, dikkatlice karıştırın ve 5 dak. Süzün, Süpernatant (50 µl) DNA
ekstraktion için kullanılır.
Numuneler 48 saatten fazla olmamak koşulu ile +2-8°C ‘de muhafaza edilir ya da–20/-80°C
dondurulur. Klinik örneklerin taşınması, etiyolojik ajanların taşınmasına yönelik ülke , federal ,
eyalet ya da yerel yönetmeliklere, uymak zorundadır.
DNA İZOLASYON
Herhangi bir ticari RNA / DNA izolasyon kiti, burada belirtilen IVD-CE "NUMUNE TOPLAMA,
MUHAFAZA VE TAŞIMA" paragrafındaki örnek türleri için valide ise, kullanılabilir.
Sacace Biotechnologies aşağıdaki kitleri kullanmanızı önerir:
 DNA-Sorb-B (Sacace, REF K-1-1/B) tam kan, BOS, doku, vs;
 SaMag Bacterial DNA Extraction kit (Sacace, REF SM006) kültürler su; DNA
ekstraksiyon için üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştirin.
10 Internal (iç) Kontrol 'ü DNA izolasyon prosedürü esnasında doğrudan numune/lysis karışımına
ekleyin.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
NUMUNE VE REAKTİF HAZIRLAMA (modül No.2 ile sağlanan reaktifler)
1. Lysis Solution ve Washing Solution (+2-8°C de muhafaza edildikleri için) buz kristalleri yok
olana kadar 60–65°C' ye kadar ısıtılmalıdır. 1.5 ml polipropilen tüplere gereken miktarda
hazırlayın,bir tüpte Ekstraksiyon Negatif Kontrol ve bir tüpte Pozitif Kontrol için.
2. Her tüpe 10 µl IC ( sadec çevresel numuneler ve kontroller için) ve 300 µl Lysis
Solüsyon ekleyin.
Lysis Solution.
3. Uygun tüpe 100 (50) µl numunelerden ekleyin.
4. Kontrolleri aşağıdaki gibi hazırlayın :
Cneg etiketli tüpe 100 µl of C– (amplifikasyon kiti ile sağlanan Neg Kontrol)
ekleyin.
CPOs etiketli tüpe 50 µl Legionella C+50 µl of C ekleyin
5. Bütün tüpleri vorteksleyin ve 5 dk. 65°C'de inkübe edin. 5-7 sn. santrifüjleyin. Eğer numune
tamamen çözünmezse, tüpün maksimum (12000-16000 g.) hızda 5 dk. yeniden
santrifüjlenmesi önerilir. Süpernatantı DNA ektraksiyon için, yeni bir tüpe aktarın.
6. Sorbenti kuvvetlice vorteksleyin ve her tüpe 25 µl ekleyin.
7. 5-7 sn. vorteksleyin ve bütün tüpleri, oda sıcaklığında 3 dk. inkübe edin. Bu adımı tekrarlayın.
8.
Bütün tüpleri 30 sn. 5000 g'de santrifüjleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet
kullanarak, her tüpten pelleti dağıtmadan, süpernatantı dikkatlice ayırın ve kaldırın. Tüpler
arasında pipet uçlarını değiştirin.
9. Her tüpe 300 µl Washing Solution ekleyin. Çok kuvvetli vorteksleyin ve 30 sn 5000g'de
santrifüjleyin.
Her bir tüpten süpernatantı ayırın ve kaldırın.
10. Her tüpe 500 µl Washing Solution ekleyin. Çok kuvvetli vorteksleyin ve 30 sn 10000g'de
santrifüjleyin. Her bir tüpten süpernatantı ayırın ve kaldırın.
11. 10. adımı tekrarlayın ve bütün tüpleri kapakları açık halde 65°C'de 5-10 dk. inkübe edin.
12. Pıhtıyı 50 µl DNA-eluent ile resüspanse edin. 65°C 'de 5 dk. inkübe edin ve periyodik olarak
vorteksleyin.
13. Maksimum hızda (12.000-16.000 g) 1 dakika boyunca tüpleri santrifüjleyin. Süpernatant,
amplifikasyon için hazır DNA içerir. Eğer amplifikasyon ekstraksiyon ile aynı gün
gerçekleştirilmezse, işlenmiş numuneler 5 günden fazla olmamak koşulu ile
2-8°C'de
muhafaza edilebilir veya –20°/-80°C'de dondurulabilir.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
PROTOKOL
1. Numuneler ve kontrol örnekleri için PCR-mix-1 reaksiyon tüpünü gerekli miktarı hazırlayın.
2. Balmumu yüzeyine 7 µl PCR-mix-2 ekleyin.
3. Uygun tüpe 10 µl ekstrakte DNA ekleyin.
4. Her kalitatif test için asağıdaki kontrolleri hazırlayın.
●
Amplifikasyon Negatif Kontrol ile etiketli tüpe, 10 µl DNA-buffer ekleyin;
●
Amplifikasyon Pozitif Kontrol etiketli tüpe, 10 µl QS3 ekleyin;
5. Her kalitatif test için asağıdaki kontrolleri hazırlayın.
●
Amplifikasyon Negatif Kontrol ile etiketli tüpe, 10 µl DNA-buffer ekleyin;
●
QS1 etiketli tüpe, 10 µl QS1 ekleyin;
●
QS2 etiketli tüpe, 10 µl QS2 ekleyin;
●
QS3 etiketli tüpe, 10 µl QS3 ekleyin;
6. Tüpleri thermalcycler'a yerleştirin.
Amplifikasyon
1. Enstrümanınızda aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun:
Rotor-tipi Cihazlar1
Adım
1
Sıcaklık
°С
95
95
60
72
95
Plate -tip enstrümanlar2
Süre
Tekrarlar
15 dk.
5
sn.
20
sn.
15
sn.
5
sn.
20 sn floresan
sinyal tespiti
1
Sıcaklık
°С
95
95
60
72
95
Süre
Tekrarlar
15 dk.
1
5
sn.
2
5
5
20
sn.
15
sn.
5
sn.
30
3
40
40
56
56
sn.
floresan sinyal
tespiti
72
72
15
15
1
Örneğin; Rotor-Gene™ 3000/6000/Qsn.
(Corbett Research, Qiagen)
sn.
2 Örneğin, SaCycler-96 ™ (Sacace), CFX96/iQ5TM (Biorad), Mx3000P / 3005 PTM (Agilent); LineGeneK®
(Bioer)
Sonuçlar, eşik hattı ile floresan eğrinin geçiş varlığı sayesinde yorumlanır.
Protrombin gen DNA amplifikasyonu FAM/Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila JOE/Sarı
kanalda algılanır.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
Kalitatif test:
Analiz sonuçları,sadece aşağıdaki kontrol numune sonucları uygunluğu durumunda geçerli
kabul edilir:
Kontrol Sonuçları
Evresi
Ct kanal Fam
Kontrol
/Yeşil
C-
DNA izolasyon
Pos (< 30)
Neg
OK
C+
DNA izolasyon
Pos (< 30)
Pos (< 30)
OK
DNA-
Amplifikasyon
Neg
Neg
OK
Amplifikasyon
Pos (< 33)
Pos (< 33)
OK
Kontrol
Ct kanal JOE/Sarı
Yorumlama
Tampon
QS3
Kantitatif test:
Analiz sonuçları,sadece aşağıdaki kontrol numune sonucları uygunluğu durumunda geçerli
kabul edilir:
Kontrol Sonuçları
Evresi
Ct kanal FAM
Ct kanal JOE
Kontrol
(Yeşil)
(Sarı)
C-
DNA izolasyon
Pos
Neg
OK
C+
DNA izolasyon
Pos
Pos
OK
DNA-buffer
Amplifikasyon
Neg
Neg
OK
QS1
Amplifikasyon
Pos
Pos
OK
QS2
Amplifikasyon
Pos
Pos
OK
QS3
Amplifikasyon
Pos
Pos
OK
Kontrol
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
Yorumlama
VER 18.12.2014
Aşağıdakilere göre kontrol ve örneklerde Legionella pneumophila DNA konsantrasyonu hesaplanır:
the following:
CL.pn. DNA (cop/L) = K L.pn. DNA/KIC х CIC х 2
CL.pn. DNA (cop/L) – 1 L su içinde Legionella pneumophila, DNA kopya miktarı;
K L.pn. DNA (cop/ml) – örnekte 1 ml Legionella pneumophila DNA kopyası hesaplanan
miktarı;
KIC (cop/ml) – örnekte 1 ml Legionella pneumophila DNA kopyası hesaplanan miktarı;
CIC (cop/ml) - Veri Kartına göre IC 1 ml IC DNA kopya miktarı,
2 – Numune filtrasyon için ayarlama.
1. Kalibrasyon eğrisi korelasyon katsayısı R2 0.97 den fazla olması gerekir.
2. Verimlilik değeri aralığında olmalıdır: 0,85 – 1,15
ANALİTİK ÖZELLİKLER ANALİTİK ÖZGÜLLÜK
Primerler ve probların analitik özgünlüğü 100 negatif numune ile valide edilmiştir. Spesifik primerler
ve problar ile herhangi bir sinyal oluşturmamışlardır.
ANALİTİK HASSASİYET
Legionella pneumophila Real-TM kitinin hassasiyeti Legionella pneumophila. Standart DNA'sı
kullanılarak tespit edilmiştir. Bu standart seri DNA-tampon maddesi içinde seyreltildi ve 3 kez
çoğaltılarak 20 kere test edilmiştir. Legionella pneumophila Real-TM kitinin analitik hassasiyeti
1000 kopya/ numune 'den daha düşük değildi.
Hedef bölge mip-gene
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
SORUN GİDERME
1. Ekstraksiyon Negatif Kontrol için, zayıf (Ct > 35) ya da olmayan IC (Fam/Yeşil kanal)
sinyali.
PCR inhibe edilmiştir.

Önerilen DNA ekstraksiyon metodunu kullandığınızdan ve üreticinin
talimatlarını izlediğinizden emin olun.
 Bütün tüpleri ekstrakte DNA pipetlemeden önce, 2 dk. maksimum (1200016000 g) hızda yeniden santrifüjleyin ve süpernatantı dikkatlice alın. Pelleti
dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder.
Reaktif muhafaza koşulları talimatlara uygun değil.
 Muhafaza koşullarını kontrol edin.
PCR koşulları talimatlara uygun değil.
Protokolde belirtilen IC tespit floresan kanalını seçin ve PCR koşullarını
kontrol edin.
IC örnek reaktiflerin pipetleme sırasında (sadece çevresel numune ve kontrol
için) ilave edilmemiştir.
 DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında dikkatli olun.
2. Zayıf (Ct > 35) ya da olmayan Pozitif Kontrol sinyali.
PCR koşulları talimatlara uygun değil.
Manuelde belirtilen floresan kanalını seçin ve aplifikasyon prosedürünü
kontrol edin.
3. Ekstraksiyon Negatif Kontrol ile Joe (Sarı)sinyal.
DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir.

Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol ile
dekontamine edin.
 Ekstraksiyon prosedürü esnasında sadece filtreli pipet uçları kullanın.
Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin.
 Yeni reaktif setleriyle DNA ekstraksiyonunu tekrarlayın.
4. PCR Negatif Kontrol (DNA-buffer) ile herhangi bir sinyal yok.
PCR hazırlama prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir.
 Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol veya özel
DNA dekontaminasyon reaktifleriyle dekontamine edin.
 Pozitif Kontrolü en son pipetleyin.
 Yeni reaktif setleriyle PCR hazırlamayı tekrarlayın.
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014
KULLANILAN SEMBOLLERİN ANLAMLARI
Liste Numarası
Dikkat!
<n> test için yeterli içerik
Lot
Numarası
C-
in Vitro Diagnostic
Kullanım için
Versiyon
Saklama
Son kullanım tarihi
Üretici
Kullanım için talimatlara
bakınız
Negatif kontrol
Ekstraksiyon
C+
NCA
Negatif kontrol
Amplifikasyon
IC
Internal Kontrol
Pozitif Kontrol
Amplifikasyon
* SaCycler™ Sacace Biotechnologiestescilli markasıdır.
* Rotor-Gene™ Qiagen tescilli markasıdır.
* CFX™ and iQ5™Bio-Rad Laboratories tescilli markasıdır.
* MX3005P® Agilent Technologies tescilli markasıdır.
* LineGeneK® Bioer tescilli markasıdır.
Sacace Biotechnologies Srl
via Scalabrini, 44 – 22100 – Como – Italy Tel +390314892927 Fax +390314892926
mail:
info@sacace.com web: info@sacace.com web: www.sacace.com
Sacace™ Legionella pneumophila Real-TM
VER 18.12.2014