Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi STRONGİLOİDİYAZ Strongyloides stercoralis Enfeksiyonu EPİDEMİYOLOJİSİ ICD-10 B78 Bu enfeksiyona Türkiye’de sınırlı sayıda olmakla birlikte hemen her bölgede rastlanmış, immün sistemi baskılanmış hastalarda hiperenfeksiyonlara yol açtığı bildirilmiştir. İnsanı en sık S.stercoralis türü enfekte eder. Enfeksiyon toprakta bulunan filariform larvalarının deriden girmesiyle oluşur. Enfekte olmuş kişilerde tekrarlayan enfeksiyonlar (oto-enfeksiyon) şeklinde de oluşabilir. Tropikal ve subtropikal ülkelerde yaygın olarak görülür. Dünya genelinde 30-100 milyon insanın S.stercoralis ile enfekte olduğu tahmin edilmektedir. Risk grupları arasında endemik bölgede yaşayanlar, göç edenler ve sığınmacılar bulunmaktadır. KLİNİK ÖZELLİKLERİ Klinik parazit sayısına, konağın immün yanıtına ve etkilenen vücut bölgesine göre farklılıklar gösterir. Genelde asemptomatiktir. Semptomatik olgularda gastrointestinal semptomlar, karın ağrısı ve ishal görülebilir. Filariform larvanın deriden giriş yerinde (kalçalar, kasıklar ve gövdede) tekrarlayan tipte (biri biten diğeri başlayan) papüler eritematöz döküntü ile kaşıntı ve ürtiker gözlenir. Larvaların göçü sırasında akciğer bulguları (öksürük, hırıltı, nefes darlığı; radyografide Löffler pnömonisi benzeri- düzensiz infiltrasyonlar) görülür. Açıklanamayan eozinofili strongiloidiyaz bulgusu olabilir. Strongiloidiyaz immün sistemi baskılanmış bireylerde yaygın (dissemine) hastalık şeklinde ölümcül seyredebilir. Bu vakalarda karın ağrısı, karında şişlik, şok, pulmoner ve nörolojik komplikasyonlar ile septisemi gelişebilir. KLİNİK TANI YAKLAŞIMI Strongiloidiyazın akla getirilmesinde şu öykü ve bulgular yol gösterici olabilir: Enfeksiyonun endemik olduğu bölgelere yapılan seyahat, endemik bölgede yaşama öyküsü; Kalçalar, kasıklar ve gövdede tekrarlayan tipte kaşıntılı, eritemli döküntü öyküsü; Alt solunum yolu semptomları öyküsü; Açıklanamayan eozinofili; Aralıklı veya kronik ishaller, iştahsızlık. STRONGİLOİDİYAZ TANISI İÇİN LABORATUVAR İNCELEMESİ Laboratuvara ne tür klinik örnekler gönderebilirim? Dışkı örneği - taze ve fiksatif içinde (%10 formalinde ve PVA veya SAF içinde) olmak üzere Duodenal materyal Balgam, bronkoalveolar lavaj (BAL) sıvısı, endotrakeal aspirat (ETA), plevral sıvı Serum Örnekleri almak için en uygun zaman nedir? Örnekler, antibiyotik ve antiparaziter bir tedaviye başlanmadan önce alınmalıdır. Dışkı örneği alınmadan önceki son 10 gün içinde, hastaya herhangi bir nedenle mineral yağ, baryum veya bizmut verilmemiş, kolonoskopi yapılmamış olmalıdır! Dışkı örneği, 10 gün içinde 3 kez (tercihen günaşırı) alınmalı ve gönderilmelidir. Örneklerle birlikte göndermem gereken özel bir form var mı? [STRONGILOIDIYAZ] Ek-4’de verilen veya benzeri bir “Laboratuvar Bilgi Formu” mutlaka ve eksiksiz olarak doldurulmalı ve örneklerle birlikte laboratuvara gönderilmelidir. Formda ön tanı mutlaka yazılmalı; ayrıca (varsa) endemik bölgede yaşama veya endemik bölgeye seyahat öyküsü mutlaka not edilmelidir. Sayfa 1 Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Örnek almak için gerekli malzeme nedir? Nasıl temin edebilirim?* Klinik örnekleri hastadan nasıl almalıyım? Gerekiyorsa, hangi işlemleri uygulamalıyım? Temiz, kuru, geniş ağızlı, sızdırmaz vida kapaklı plastik kap Şehir içi Şehirler arası (kısa mesafe) (uzun mesafe) taşıma süre-sıcaklık taşıma süre-sıcaklık Dışkı: Hastaya tarif edilerek örnek vermesi sağlanır (en az 45 gr veya sulu ise 4-5ml). Dışkıya idrar karışmamalıdır! Taze örnek <30 dk; OS Taze örnek: <24s; +4C, 30 dk içinde incelenemeyecekse dışkı üç kaba ayrılmalı; birinciye fiksatif koymadan (taze), ikinciye dışkı miktarının 3 katı kadar %10’luk formalin, üçüncüye de dışkı miktarının 3 katı kadar PVA veya SAF ilave edilerek laboratuvara gönderilmelidir. Taze örneklerin kurumasına izin vermeyiniz! Fiksatifte; OS Fiksatifte; <72 s; OS <30 dk; OS <24s; +4C Steril SF Duodenal içerik: String-Test (Entero-Test kapsül) uygulaması ile alınabilir. Hekim tarafından uygulanmalıdır. Bunun için; ipinin ucu hastanın yanağına veya boynuna sabitlendikten sonra Entero-test kapsül hastaya yutturulur. Bu süre içinde hasta herhangi bir şey yememeli, dinlenmelidir. 4 saat sonra kapsül geri çekilir. Steril, vida kapaklı bir tüpün içine konarak laboratuvara gönderilir. 1 saat içinde incelenemeyecekse kurumayı önlemek için 1ml steril SF eklenir. Temiz, kuru, geniş ağızlı, sızdırmaz vida kapaklı plastik kap, Duodenal sıvı veya biyopsi: Endoskopik girişim ile klinisyen tarafından alınır. Steril, ağzı vida kapaklı bir tüpe konmalıdır. Taze örnek <30 dk; OS Taze örnek: <24s; +4C, Biyopsi örneği 30 dk içerisinde incelenemeyecekse örnek iki tüpe ayrılır; birine %10’luk formalin ilave edilir, diğerine kurumayı önlemek için 1ml steril SF eklenir ve tüpler birlikte laboratuvara gönderilir. Örneklerin kurumasına izin verilmemelidir! %10’luk formalinde örnek; OS %10’luk formalinde; <72 s; OS ≤2 s; OS <24 s; +4C BAL, ETA, fırçalama ya da yıkama: Örnek hekim tarafından bronkoskopi şartlarında alınır. Steril distile su veya steril SF kullanılır. Mümkünse 5-10 ml örnek alınmalıdır. Örnek uygun örnek kabına yıkayarak ya da aspire edilerek toplanır. Fırça 2-3 ml SF içeren steril bir taşıyıcı tüpe konur. ≤2 s; OS <48 s; +4°C Serum: Hastadan önerilen tüpe 5 ml kan alınır; 5-6 kez yavaşça alt üst edilerek karıştırılır. Çalkalama işleminden kesinlikle kaçınılmalıdır. 15-20 dk bekledikten sonra santrifüj edilir ve laboratuvara gönderilir. ≤1 s; OS ≤48 s; +4C >1 s; +4C >48 s; kuru buzda (-70C) Fiksatif olarak - %10’luk formalin ve PVA (veya ‡ SAF) Etanol Temiz, kuru, geniş ağızlı, sızdırmaz vida kapaklı plastik kap, %10’luk formalin Steril SF Steril, geniş ağızlı, vida kapaklı kap PCR için dışkı örneği yaklaşık “1gr dışkı/1ml etanol” olacak şekilde, etanol ile karıştırılır. § Balgam: Örnek kalitesi önemlidir. Tükürük örnekleri kabul edilmez. Bunun için hastaya nasıl örnek vereceği iyi tarif edilmelidir. Mümkünse hasta oral florayı uzaklaştırmak için ağzını çalkalamalı veya gargara yapmalıdır. Hastanın postnazal sıvı değil alt solunum yolu örneği verebilmesi için iyi bir şekilde yönlendirilmesi gerekir. Derin bir inspirium ve ardından öksürük ile çıkarılmış, en az 3 ml balgam, uygun örnek kabına toplanır. Balgam provoke edilebilir (indüklenmiş balgam). Bunun için bir nebulizör yardımı ile hastaya %3-10’luk hipertonik tuzlu su solutulur (25 ml veya 15-20 dk boyunca). Sonra derin öksürük ile balgam örneği uygun örnek kabına toplanır. İndüklenmiş örneğin tükürük sanılarak reddedilmemesi için üzerine indüklendiğine dair not yazılmalıdır! Steril, vida kapaklı (sızdırmaz) tüp veya geniş ağızlı kap, Steril distile su veya SF Antikoagülansız, jelli vakumlu, serum tüpü DİKKAT: ağzı pamuk tıkaçlı veya flasterli bir tüp, asla kullanılmaz! >2 s; +4°C Laboratuvara ulaşma süresi >48 saat ise (ya da jel içermeyen kan tüpü kullanılmış ise) serum kısmı santrifüj sonrası hemen steril bir tüpe ayrılmalıdır. Bu serum en fazla 5 güne kadar buzdolabında saklanabilir; örneğin gönderilmesi daha uzun sürecek ise örnek -20C’ye veya -70C’ye kaldırılmalı; çözülmeden kuru buzda laboratuvara ulaştırılmalıdır. Kısaltmalar - s: saat; dk: dakika; OS: oda sıcaklığı; SF: serum fizyolojik * Tabloda önerilen örnekleme malzemesini -ayrıca belirtilmedikçe- hastanenizin laboratuvarından temin edebilirsiniz. § Hastalardan alınan iyi bir örnek X10 büyütmede bir alanda ≤10 skuamöz epitel hücresi bulundurur. ‡ Formol konsantrasyon teknikleri için, PVA (veya SAF) ise dışkıdan kalıcı boya yapılabilmesi için gereklidir. Her dışkı örneği bu iki fiksatife de konmalı ve laboratuvara öyle gönderilmelidir! Hastanenizin laboratuvarı bu fiksatiflerin yerine hazır fiksatif içeren ticari dışkı kabı temin edebilir. Ticari dışkı kabı içeriğinin aynı amaçlara karşılık geldiğinden emin olunmalıdır. Sayfa 2 [STRONGILOIDIYAZ] Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Güvenlik önlemleri nelerdir? Kendimi nasıl koruyabilirim? En ciddi risk kan alma işlemi esnasında personele kan-kaynaklı patojenlerin (özellikle HIV ve hepatit etkenleri) bulaşma riskidir. Kan alma, serum ayırma gibi işlemler yapılırken kesinlikle eldiven giyilmeli, standart güvenlik önlemleri uygulanmalıdır. Ayrıca her türlü klinik örnek “enfeksiyöz” kabul edilmeli ve bu örneklerle çalışılırken standart güvenlik önlemleri alınmalı, uygun kişisel koruyucu ekipman giyilmelidir. Örnekleri hangi laboratuvara gönderebilirim? Dışkıda Strongyloides tanısı, bünyesinde Mikrobiyoloji veya Parazitoloji Uzmanı bulunan her laboratuvarda -rutin dışkı parazitolojisi kapsamında- konabilir. Hastanenizin / Merkezinizin laboratuvarı bu koşulu sağlamıyorsa, bu koşulu sağlayan en yakın laboratuvar ile bağlantı kurunuz. String test, duodenal sıvı, akciğer enfeksiyonu şüphesinde alınmış balgam, BAL/ETA ve serolojik/histolojik tanı için alınmış örnekleri ise size en yakın Parazitoloji Birimi olan Üniversite veya Eğitim Araştırma Hastanesi Laboratuvarına gönderiniz. NOT: Biyopsi örnekleri Patoloji Laboratuvarına gönderilebilir ve histolojik preparatlar burada hazırlanabilir. Bu durumda mikroskopik incelemenin Parazitoloji Uzmanının konsültasyonu ile yapılması idealdir. Hangi durumlarda örnekler laboratuvara kabul edilmez? Şu örnekler laboratuvara kabul edilmez: Hangi laboratuvar incelemelerini isteyebilirim? Sonuçları ne kadar zamanda alabilirim? Sonuçları nasıl yorumlamalıyım? Direkt (manuel) parazit incelemesi ve Gaitada konsantrasyon yöntemi ile parazit aranması 1 gün Dışkı*, balgam veya duodenal materyalin mikroskopik incelemesinde Strongyloides larvalarının görülmesi – “kesin tanı” bulgusudur. Koprokültür 2 gün-1 hafta yüzeyi veya kenarları kurumuş dışkı örnekleri; kibrit kutusu v.b. gibi uygun olmayan bir kaba alınmış dışkı örnekleri; 7-10 gün içerisinde lavman veya kolonoskopi yapılmış hastaların dışkı örnekleri; taşıma kabı hasar gördüğü için dışına sızmış örnekler; önerilen süre içerisinde ve uygun sıcaklıkta gönderilmemiş örnekler; hemolizli veya lipemik serum örnekleri (hatalı sonuç verebilir) örnek kabı üzerinde hasta bilgileri yazılı olmayan örnekler; hastaya ait uygun bir istek formu düzenlenmemiş örnekler. İlk inceleme sonucunun “negatif” bulunması halinde, hastanın 1-2 gün ara ile ikinci ve gerekirse üçüncü örneği vermesi istenmelidir. ‡ Larvaların görülmesi “kesin tanı” bulgusudur. ‡ Parazite karşı gelişmiş antikorların veya parazit antijenlerinin saptanması klinik tanıyı veya kronik latent enfeksiyonu destekler. ‡ Güçlü bir şekilde strongiloidiyaz ön tanısını destekler. Seroloji 1 gün Moleküler tanı (PCR) 2 gün * Laboratuvarın hem direkt mikroskopik inceleme hem de bir konsantrasyon işlemi sonrası mikroskopik inceleme yaptığından emin olunuz! Yalnızca direkt mikroskopik inceleme yapıldığında duyarlılık çok düşüktür ve hastalık atlanabilir. ‡ Sonuç çıkış tarihi için laboratuvar ile iletişim kurunuz. Daha fazla bilgi için önerilen kaynaklar: 1. Montes M, Sawhney C, Barros N. Strongyloides stercoralis: there but not seen. Curr Opin Infect Dis. 2010; 23(5): 500-4. 2. Akısü Ç. Strongyloidosis. In: Özcel’in Tıbbi Paraziter Hastalıkları. Özcel A, Özbel Y, Ak M, eds. Türkiye Parazitoloji Derneği Yayın No: 22. İzmir, 2007; s. 757-767. 3. Centers for Disease Control and Prevention. Laboratory identification of parasites of public health concern. Strongyloidiasis. http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Strongyloidiasis.htm [erişim tarihi: 15.05.2011] 4. Fox LAM. Strongyloidiasis. Traveler’s health. Centers for Disease Control and Prevention. http://wwwnc.cdc.gov/travel/yellowbook/2010/chapter-5/strongyloidiasis.htm [erişim tarihi: 15.05.2011] 5. Sheorey H, Biggs BA, Traynor P. Nematodlar. (In: Manual of Clinical Microbiology. Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Landry ML, Pfaller MA, eds.) Klinik Mikrobiyoloji, 9. Baskı. Çeviri editörü: Başustaoğlu A, Atlas Kitapçılık, Ankara, ISBN 978-975-7175-84-1, 2009; s. 2144-2155 [STRONGILOIDIYAZ] Sayfa 3