XVI. Unsal Kimya Kongresi, Konya, 2002 BK

XVI. Unsal Kimya Kongresi, Konya, 2002
BK-S26
SIĞIR ERİTROSİTLERİNDEN GLUTATYON REDÜKTAZ ENZİMİNİN
SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU
Mustafa ERAT1, Halis ŞAKİROĞLU2, Mehmet ÇİFTÇİ12
'Atatürk Üniversitesi Biyoteknoloji Uygulama ve Araştırma Merkezi, 25240
"Atatürk Üniversitesi Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 25200,
Erzurum
Giriş
Glutatyon metabolizması, antioksidan savunma sisteminin mühim bir öğesidir. Sistemin temel
elemanı indirgenmiş glutatyon, oksidatif oluşumlar karşısında indirgeyici bir ajandır. Bu
sistemde görev yapan glutatyon redüktaz enzimi ise indirgenmiş glutatyon (GSH)/okside
glutatyon (GSSG) oranını korumada rol oynayan kilit enzimdir. Bu çalışmada glutatyon
redüktaz enzimi sığır eritrositlerinden amonyum sülfat çöktürmesi, afinite ve jel filtrasyon
kromatografileri yöntemleriyle saflaştırarak karakterize etmeyi amaçladık.
Yöntem
Çalışmamızda enzim, amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, afinite kromatografisi ve jel
filtrasyon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. Karakterizasyon çalışmaları için ise jel
filtrasyon kromatografisi ve SDS-PAGE yapılarak enzimin yapısı ve molekül ağırlığı
hakkında bilgi elde edildi.
Sonuç
Sığır eritrosit glutatyon redüktaz enzimi amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, afinite
kromatografisi ve jel filtrasyon kromatografisi yöntemi kullanılarak 12,86 verimle 31375 kat
saflaştırıldı. Enzimin molekül ağırlığı jel filtrasyon kromatografisi ve SDS-PAGE ile tayin
edilerek dimerik yapıda olduğu belirlendi. Optimal enzim aktivitesi için uygun tamponun
fosfat, iyonik şiddetin 0,5 M, pH değerinin 7,20 ve sıcaklığın ise 55 °C olduğu belirlendi.
Kaynaklar
1. Carlberg, I. and Mannervik, B., Anal. Biochem., 1981, 116, 531.
2. Laemmli, U. K., Nature, (London,) 1970, 227, 680.
3. Whitaker, J.R., Anal.Chem., 1963 35, 1950.
394