MALZEME LİSTESİ PROJE NO: 2013/16 S. MALZEMENİN ADI NO 1. XcmI Restriksiyon Enzimi 2. Alu I Restriksiyon Enzimi 3. Nco I Restriksiyon Enzimi 4. NlaIIIRestriksiyon Enzimi 5. Rsa I Restriksiyon Enzimi 6. Mnl I Restriksiyon Enzimi 7. XmnI Restriksiyon Enzimi 8. PvuII Restriksiyon Enzimi 9. Ava I Restriksiyon Enzimi 10. BstUI Restriksiyon Enzimi 11. Scrf I Restriksiyon Enzimi 12. DraIIIRestriksiyon Enzimi 13. Fok I Restriksiyon Enzimi 14. BsmFIRestriksiyon Enzimi 15. NlaIIIRestriksiyon Enzimi 16. Bbv I Restriksiyon Enzimi 17. MspI Restriksiyon Enzimi 18. BsmI Restriksiyon Enzimi 19. ApaI Restriksiyon Enzimi 20. Taq I Restriksiyon Enzimi 21. Taq Polimeraz 22. Primer 23. Agaroz 24. Nusieve 25. dNTP set 26. PUC MiX marker 27. 100 bp’lik marker 28. 50 bp’lik marker 29. Tris 30. EDTA 31. Borik asit 32. Etidyum bromide 33. Pipet ucu BİRİMİ MİKTAR 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest 5 adet 1000 U Fast Digest 5 adet 5 adet 1000 U 1000 U Fast Digest Fast Digest 5 adet 5 adet 1000 U 1000 U Fast Digest Fast Digest 5 adet 5 adet 1000 U 1000 U Fast Digest Fast Digest 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 5 adet 20 adet 1500bp 5 adet 1 adet 2 adet 1 adet 3 adet 3 adet 1 adet 1 adet 1 adet 1 adet 50 paket 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 1000 U 500 U Fast Digest KDV ORANI AÇIKLAMALAR Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest Fast Digest HPLC saflıkta 200nmol 200 gr 100 gr 4X250 ul 1 kg 500 gr 1 kg 1 gr 96’lık kutu 34. Pipet ucu 50 paket 96’lık kutu 35. Pipet ucu 10 paket 96’lık kutu 36. PCR tüpü 37. PCR tüpü 1000’lik poşet 1000’lik poşet 38. Parafilm 20 paket 20 paket 3 rulo 100 mM Molecular Biologic Grade Molecular Biologic Grade Molecular Biologic Grade Molecular Biologic Grade 0.1-20 µl sıvı çekebilen, RNase, DNase free, beyaz, otoklavlanabilir, Gilson marka otomatik pipetle uyumlu, filtreli 10-100 μl sıvı çekebilen, sarı, DNAaz RNAaz free, , otoklavlanabilir, Gilson marka otomatik pipetle uyumlu, filtreli 100-1000 μl sıvı çekebilen, mavi, DNAaz RNAaz free, otoklavlanabilir, Gilson marka otomatik pipetle uyumlu, filtreli 0.5ml hacimli DNAaz RNAaz free, 0.2ml hacimli RNAaz free, DNAaz BİRİM FİYAT TOPLAM FİYAT 39. 40. DNA saklama kutusu Ependorf tüp 5 kutu 5 paket 41. 42. 43. 44. DNA İzolasyon kiti 5 ml’lik EDTA’lı tüp Eldiven 0.5 ve 0.2 ml’lik PCR tüpleri ile uyumlu rack 0.5 ve 0.2 ml’lik PCR tüpleri ile uyumlu buzlu rack 2 kutu 5 kutu 10 kutu 5 adet 45. Teknikşartnameler ek’tedir. 5 adet 1000’lik poşet 100 gözlü, plastik DNase, RNase free 250 örneklik 100’lük small ölçü, pudralı, vinil 16X5 gözlü PCR çalışması için uygun PROJE NO: 2013/16 TEKNİKŞARTNAMELERİ Taq DNA Polymeraz 1.Enzim ,thermophilic bacteri olan Thermus aquatıcus suşhundan elde edilmiş olmalıdır. 2.Enzim,hem 5’ 3’ ,hemde 3’ 5’ exonuclease aktivitesi göstermemelidir. 3.Konsantrasyonu 5Ü/ ul ,ambalaj şekli 500Ü şeklinde olmalıdır.Enzimin Proofreding özelliği olmalıdır. 4.Enzim ile birlikte aşağıdaki solüsyonlar teslim edilmelidir. 2adet 1.25ml lik 10X Taq Buffer Potasıum Chlorıde li KCI 2adet 1.25ml lik 10X Taq Buffer Ammonıum sülfat lı ( NH4 ) 2 SO4 2adet 1.25ml lik 25 mM lık Magnesıum chlorıde MgCI2 Ammonum sülfat solusyonlu 10X Taq buffer lar elektroforez sırasında oluşabilecek bant kaymalarını(smilling) önlediği ve bantların temiz ve net çıkmasını sağladığı için özellikle tercih edilmektedir. 5.Enzim ambalajı üzerinde son kullanma tarihi görülebilir olmalı ve bu süre 3( üç) yıldan fazla olmalıdır. 6.Teslimatlar (-20C ) soğuk zincir ortamında yapılmalıdır. 7.Enzim ile teslim edilecek buffer içerikleri aşağıdaki gibi olmalıdır. 10X Taq buffer with KCI: 100mM Tris HCI (PH :8.0 ) ,500mM KCI 0.8% Nonidet P40 10X Taq buffer with ( NH4)2 SO4 : 750mM Tris HCI (PH : 8.8 25C de ) , 200mM (NH4)2 S04 ,0.1% Tween 20 8.Teklif edilen enzim markaları ,bölüm laboratuvarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. Primer 1.Konsantrasyonu 0.2 umol (200nmol) olmalıdır. 2.HPLC yöntemi ile purifiye edilmiş olmalıdır. 3.İlgili sentez raporu ile teslim edilmeli.Rapor üzerinde primere ait scala,oligonucleotıd dizilimi ,100pmol için sulandırma miktarı,Grafiksel sentez görüntüsü, GC ,AT konsantrasyonu belirtilmelidir. 4.Teklif veren firmalar ; primerleri bölüm laboratuarımızda kullanılmamış veya kullanılıp uygun netice alınmamış ise tekrar denenmek istenen markalar için numune primer sentezlemelidirler.Kullanılmayan veya deneme yapılmayan ürünler değerlendirme dışı bırakılacaktır. Agaroz 1.Agaroz ,kullanım kolaylığı bakımından 100 gr lık ambalajlarda olması tercih nedenidir. 2.Agaroz düşük EEO değerli nucleic acit (DNA ,RNA ) Fragmanları ve proteınlerin ince ayırımı için uygun olmalıdır. 3.Blotıng deneyleri için uygun olmalıdır. 4.Radıal Immundiffusion ( RID) ve Ouchterlony tekniklerine uygun olmalıdır. 5.Moleküler çalışmalar için uygun olmalıdır. 6.Özellikleri ; Nem %7 nin altında , Kül %0.40 dan daha az , Sülfat oranı %0.14 den az, Şeffaflık (%1.5 lik gel için) %40 dan az , Gel dayanıklılığı cm2 de 2500 gr dan yüksek, Jelleşme sıcaklığı 36 C , Erime noktası 88C , şeklinde olmalıdır. 7.Agaroz 1000 bp den küçük ayrımlar için uygun olmalıdır. 8.EEO değeri 0.05 – 0.13 arasında olmalıdır. 9. Teklif edilen agaroz markaları ,bölüm laboratuarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. NUSİEVE Agaroz 1.Agaroz ,kullanım kolaylığı bakımından 25 gr lık ambalajlarda olması tercih nedenidir. 2.30 -2000 bp arası PCR ürünleri ,DNA RNA parçalarının ayırımı için özel olarak üretilmiş sert fakat esnek jeller elde etmek için formüle edilmiş özellikte olmalıdır. 3.Agaroz düşük DNA tutma özelliğine sahip olmalıdır. 4.Agaroz Moleküler Biyoloji çalışmalarına uygun DNASE RNASE free özellikte olmalıdır. 5.Agaroz aşağıdaki özelliklere sahip olmalıdır. a. Nem : %7 nin altında b. Kül : %0.35 dan daha az c. Sülfat oranı : %0.11 den az d. Şeffaflık : (%1.5 lik gel için) %50 dan az e. Gel dayanıklılığı : cm2 de 2000 ug den yüksek f. Jelleşme sıcaklığı : 40,5 C g. Erime noktası : 93 C nin altında , şeklinde olmalıdır. 8.EEO değeri 0.05 – 0.12 arasında olmalıdır. 9. Teklif edilen agaroz markaları ,bölüm laboratuarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. dNTP Set 100mM 1.Tüm deoxyribonucleaselar( dATP,dGTP,dCTP,dTTP ) ayrı ayrı tüp de olmalıdır. 2.Tüplerin konsantrasyonu 100mM olmalıdır. 3.Her bir tüpün hacmi 250ul(0.25 ml) olmalıdır. 4.Formülünde Na(Sodıum) tuzu bulunmamalıdır. 5.Purifikasyonu HPLC ile % 98 verimlilikte yapılmış olmalıdır. 6.Teslimatlar (-20C ) soğuk zincir ortamında yapılmalıdır. 7.Teklif edilen markalar ,bölüm laboratuarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.PCR Mıx ini oluşturan ürünlerin aynı marka olması tercih nedeni olacaktır.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. DNA Ladder 100bp 1.Marker ,50 ug lık ambalajda olmalıdır. 2.Marker in DNA miktarı spectrofotometrik ölçüm ile test edilmiş olmalıdır. 3.Marker 15 fragment içermelidir.Bunlar;100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1200, 1500,2000,2500,3000bp olmalıdır. Bu bantlar haricinde bir bant içermemelidir.500,1000,3000bp referans bant olmalıdır. 4.Marker 6X gel yükleme bufferı ile teslim edilmelidir.Yükleme buffer ının içeriği ; 10MM Tris –HCI (PH 7.6 )%0.03 Bromophenol blue, % 0.03 xylene cyanoleFF, %60 Glycerol, ve 60Mm EDTA olmalıdır. 5. Teslimatlar (-20C ) soğuk zincir ortamında yapılmalıdır. 6. Teklif edilen marker markaları ,bölüm laboratuarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. 7.Teklif edilen ürünün(MARKA) yetkili satıcılık belgesi teklif ile birlikte sunulmalıdır., DNA Ladder 50bp 1.Marker ,50 ug lık ambalajda olmalıdır. 2.Marker in DNA miktarı spectrofotometrik ölçüm ile test edilmiş olmalıdır. 3.Marker 15 fragment içermelidir.Bunlar;100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1200, 1500,2000,2500,3000bp olmalıdır. Bu bantlar haricinde bir bant içermemelidir.250,500 bp referans bant olmalıdır. 4.Marker 6X gel yükleme bufferı ile teslim edilmelidir.Yükleme buffer ının içeriği ; 10MM Tris –HCI (PH 7.6 )%0.03 Bromophenol blue, % 0.03 xylene cyanoleFF, %60 Glycerol, ve 60Mm EDTA olmalıdır. 5. Teslimatlar (-20C ) soğuk zincir ortamında yapılmalıdır. 6. Teklif edilen marker markaları ,bölüm laboratuarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. 7.Teklif edilen ürünün(MARKA) yetkili satıcılık belgesi teklif ile birlikte sunulmalıdır. RESTRİCTION ENDONUCLEAS 1.Tüm kesim enzimleri en az 200 reaksiyonluk olmalıdır. 2.Enzimler FastDigest ( hızlı kesim ) özelliğinde olmalıdır. 3.Enzimlerin genel inkübasyon sıcaklığı 37 C olmalıdır. 4.Her bir enzim ile birlikte ; 10X Fast digest Buffer 1ml ve 10X FastDigest green Buffer verilmelidir.Green buffer kullanımı ile elektroforez aşamasında yükleme solüsyonu kullanımı gerekmemelidir. 5.Enzimler ile verilen bufferlar ,o enzime özgü olmayıp diğer tüm enzimlerde kullanılabilmelidir.Bu sayede yetersiz buffer sorunu yaşanmamalıdır. 6.Her kesim enzimi kendine özgü bilgi sayfası ile teslim edilmeli ve bu bilgi sayfasında , kullanılan ürüne göre hangi sürelerde kesim yapabildiği görülmelidir. a) Lambda DNA .. dakika b) Plasmid DNA .. dakika c) Genomic DNA .. dakika d) PCR ürünü .. dakika 7.Ürüne ait belirtilen özellikler katalog da görülebilmelidir. 8.Ürün soğuk zincir koşullarında teslim edilmelidir. 9.ürünün kullanım miadı en az iki yıl olmalıdır. 10.Teklif edilen enzim markaları ,bölüm laboratuvarımızda kullanılmamış ise firmaların örnek bırakmaları gerekmektedir.Yapılan çalışma sonucu aktivasyonlarına göre değerlendirilecektir.Örnek vermeyen firmaların teklifleri değerlendirilmeyecektir. ETHANOL-TRİS-EDTA-BORİC ACİD 1.Moleküler çalışmalar için uygun olmalıdır. 2. Teklif ile birlikte ürünlerin moleculer biology grade olduğunu gösteren data sheetler verilmelidir. PİPET UCU 0,1-20 UL VE 10-100 UL 1. 2. 3. 4. DNASE –RNASE free olmalıdır. Gilson marka pipetlere uygun olmalıdır. Pipet uçları filtreli olmalıdır. İçinde 96 adet pipet ucu bulunan racklar teslim edilmelidir. PCR TÜPÜ 0,5 ML VE 0,2ML-EPPENDORF TÜP 1. 2. 3. 4. DNASE –RNASE free olmalıdır. 121 C otoklavlanabilmelidir. 10,000 x g santrifüjlenmeye uygun olmalıdır. PCR tüpleri ince duvarlı olmalı ,polypropilen malzemeden üretilmiş olmalıdır. 5 ML EDTALI TÜP 1. Vakumlu olmalıdır.