12. Ulusal Kimya Kongresi, Edirne, 1998 S-0305 ANKARA ARMUDUNDAN POLİFENOL OKSİDAZ ENZİMİNİN İZOLE EDİLMESİ VE KARAKTERİZASYONU Emine ZİYAN*. Şuie PEKYARDIMCi* *Ankara Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, Beşevler- ANKARA Polifenol oksidaz enzimi (PPO), meyve ve sebzelerde çok yaygın olarak bulunan ve fenoiik bileşiklerin oksidasyon ve polimerizasyonları sonucu istenmeyen koyu renkli pigmentlere yol açan bir enzimdir. Bu çalışmada polifenol oksidaz enzimi, Ankara armudundan (Pirus comminus) izole edilmiş ve saflaştırılarak enzimin karakterizasyonu yapılmıştır. Armutlar, PPO enzim aktivitesinin korunması için %0,5 polivinil pirolidon ve 0,05 M askorbik asit içeren fosfat tamponu ile (pH=6,8) homojenize edilip, süzülmüştür. Daha sonraki saflaştırma işlemleri amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon yöntemleri ile yapılmış ve tüm saflaştırma adımları +4°CJda gerçekleştirilmiştir. Saflık kontrolü ve molekül kütle tayinleri poliakrilamid jel elektroforezi ile yapılmış ve üç İzoform belirlenmiştir. Protein tayinleri için Lowry yöntemi kullanılmıştır. Amonyum sülfat çöktürme ve diyalizden sonra elde edilen enzim, PPO enzimini karakterize etmek için kullanılmıştır. Katekol, 4-metil katekol, L-dopa, pirogalol, gallik asit, p-krezol, D-tirozin, klorojenik asit ve kafeik asit substrat olarak kullanılarak aktivite tayinleri yapılmış ve armut PPO enzimi İçin en iyi substratların katekol ve 4-metil katekol olduğu belirlenmiştir. Optimum sıcaklık, depolama şartları ve kinetik özellikler belirlenirken, substrat olarak katekol ve 4-metii katekol, optimum pH belirlenirken tüm substratlar kullanılmıştır. Kinetik parametreler olan Kmve Vmax değerleri substrat olarak Katekol kullanılarak Lineveawer-Burk diyagramından hesaplanmış ve sırasıyla 3f86.10'3M ve 5,5.10’1AA/dak. olarak bulunmuştur. Ayrıca L-sistein, askorbik asit, sodyum azid, sodyum dietil ditiyokarbamat, tiyoüre ve p-merkaptoetanol inhibitör olarak kullanılarak, bunların ne tür inhibisyon yaptıkları belirlenmiştir. 210