GAzl üNlVERslTEsl BlLlMsEL ARAşT|RMA PRoJELER| lHTlYAç FoRMu elRlı,ü|lve PRoJE YöNErlclslNlN ADl soYADl BöLüMü TAR|Hl No 1610312017 1 PRoF.DR. GöNEN özcAN Diş Hekimliği Fakültesi Temel Dişhekimliği Bilim. TEL | 203423244 45 GAzl oNlVERslTEsl REı(TöRLOĞO,NE (Bilim8ol Araştrma Projeleri Bİdml) '03/201743' kodlu ve 'ozon Gaz ıryguhmala$nln Poıi.lmplant tsln Tedavislndold Etldnllğlnln D€ğo[l€rıdldlm*r konulu projem için zorunlu olan aşağlda cinsi, miktarl ve özellikleri yazlll toplam 2 kalem hazmetin / malzemenin / teçhizatn tahsis edilen ödenekten temin edi|mesi için bilgi|erinizi Ve gereğini arz ederim. oo imza slra No Malz€m€nin cinsi Miktarl öls, Özelliği Birimi 1) Rna izolasyon kiti; 50 örnekten RNA izolasyonuna imkan sağlayacak miktarda olmalldür, Kit içe.ik bilgileri; a) Kit, Fenol ve guanidin tiyosiyonatln monofazik solüsyonu olmalIdlr. b) DNA, RNA ve protein izolasyonlan için uygun olmalüdlr. c) Kit, birim ambalajl 50ml olmak üzere '1 adet olacak şekildo toslim odilm6lidir. d) Kültüre edilmiş hücrodon, dokudan veya kandan .. izolasyon yapılabilmelidir. 2)ornok saylslna yelerli mlktarda cDNA ssnlez kili; a.Kit RNA'dan tek zincirli cDNA sentezinde kullanüan tüm reaktifleri içermelidir. sentezlenen coNA PcR amplafikasyonu Ve .eal-time PcR da kullanllabilecek nitelikte olmalldlr, b.Kit; GDNA sentezi için primer Ve template DNA haricinde başka malzeme goreksinimine ihtiyaç duymamalldür. 1 Gen eksp.esyon seti 5 gen ( RNA izolasyon kiti cDNA sentez kiti primer probe seta 1500 rxn Mastermix ,| 1 adet set c.cDNA sentezinde kullanllan reverse t.anscriptase enziminjn RNA'ya bağlı DNA Polimeraz activitesi, DNA' ya bağlI DNA polimeraz activitesi, çift zancir çözümleme ve RNase H activilesi olmalldlr. d.Kit aşağldaki reaktifl eri içermelidir; i.Transcİiptor Reverse ii.Transcriptase iil.Transcriptor RT Reaction Buffer (5x) iv.Protector RNase lnhibitor v.DeoxyniJcleotide Mix Vi.Anchored-oligo(dT) 1 8Primer vii.Random Hexamor Primer Viii.KontrolRNA ix.Kontrol Primor Mix PBGD x,su, PcR{rade e.Kal minimum 50 reaksiyon yapabilmeıidir. f.Kil, Hlgh Fldehty özellikll olmall ve 1ng-4pg alasındaki konsankasyona sahip tüm RNA'larl cDNA ya çevirebilmeljdjr. g.Kitin çallşma süresi45 dk yl geçmemelidir. h.Lightcylcer real-tjme PcR cahazüna vo primer setine uygun masler miks ve platelel is(enmektedir. 3)Primel dzileri vo özellikleri son kullanlcl taraflndan Çahşma öncesi firmaya bildi.ilecektir. Dizayn edilecek primer-probe setleri sclerostin, oPG, VEGF, lL-1 B, lL8 ve AOTB gen bölgelerine özgü olmall ve içerik olarak aşağldaki glbi olmalldlr, a,Probe-plimer mix. 300 reaksiyon çallşabilmelidir b.Problal. Lightcycler R6al Tim6 PcR cihaZlarlnda slra No Malzomonİn cinsi Miktarl ölçu Özelliği Birimi çallşma için optimizde edilmiş olmalldlr, c.Problar. inlernel üzerinden dizayn edilebilmeli ve primer-probe kanşlm halınde gelmeli. d,çallŞma slraslnda p.imeFprobe iÇin t6krar bil konsantrasyon ayan yapmaya gerek duyulmamalldlr. e.Probe un kallp DNA ya bağlanma slcakllğl 60 santiglad dereceye optimizo odilmiş olmalldlr. f,Probe. FAM ile işarotlonmiş yaklaşlk 8-9 baz llk oligonikleotid dizisi olmall Ve Taql\.4an p.obe gibi çallşmalldür. 4)Çallşma süresince yelerli miktarda Probe İVlaster |\,,liks; a,Klt Llghtcycler cihaztna uyumlıJ olmaıldlr. b.Absolute Ve R6lative Quantificalion anallzi yapmayl sağlayacak hot-start özellikli PcR master mixi olmalldlr, c.Gen eksprosyonu Ve kantitasyon çallşmalannda kullanlma uygı]n olmalıdır d.Hidroliz (Taq[.1an) probu ve Universal Probe Library problanyla kullanlma uygun olmalldlr. e.Kit'e dışandan sadece prob6, primer V6 kalıp DNA veya cDNA eklemek gerekmektedir lKit 2x Konsantrasyon da olmalldlr g,optimizasyonıJ için ekstra [49Cl2 eklenmesi gerekmemelidir. h,Kit 500 reaksiyon için yetecek miktarda olmalıdır. 5) ÇallŞmadakıJllanllacakkapiller; a.20pl hacimli, 1.5 mm dlş çapll polapropilen başlIkll ve kontaminasyon riskini azaltacak bir kapağı olmaıdür. b.Kapaklar kapiller kutusu içinde steril şekiıde dizili olma|l ve Lc cihaz| ile birlikte verilen otomatik bir alet yardlmlyıa rahatllkla yerleştirilmelidir. c.PcR performanslnln ve optimal floresan hansmisyonun(,in sağlanabilmesİ için yüksek kalitelı bir borisiljkat cam kullanllmlş olmasl gerekmektedar. d.Bir kolide 96 kapiler Ve kapak içeren 5'li kutular halinde olmalldlr, e.Lightcyc|er ReaLTimo PcR cihazl kapjller modeli ile kullanlma uygun olmalldlr. Çallşmanln başlnda, ilgilifirma taraflndan uvouIama desteöi mutlaka verilmelidir. 6) 2 penopaper 2 adet