Turk J Vet Anim Sci 26 (2002) 761-764 © TÜB‹TAK Araflt›rma Makalesi Antalya ‹linde Yetifltirilen K›l Keçilerinde Potasyum ve Hemoglobin Polimorfizmi* Kemal KARABA⁄, M. Soner BALCIO⁄LU, M. Ziya FIRAT, H. ‹brahim YOLCU Akdeniz Üniversitesi, Ziraat Fakültesi, Zootekni Bölümü, Antalya – TÜRK‹YE Gelifl Tarihi: 07.02.2001 Özet: Bu çal›flmada, Antalya ili çevresinde yetifltirilen K›l keçilerinde tüm kan potasyum ve hemoglobin (Hb) polimorfizmi araflt›r›lm›flt›r. Rasgele al›nan 188 K›l keçisine ait kanda eritrosit hemoglobin tiplemesi yatay niflasta jeli elektroforezi ile ve tüm kanda potasyum seviyesinin analizleri ise atomik absorbsiyon spektrometresi ile yap›lm›flt›r. Yap›lan analizler sonucunda KH gen frekans› 0.985±0.038 olarak tahmin edilmifltir. ‹ki hemoglobin alleli (HbA,HbB) belirlenmifl ve HbA’ n›n gen frekans› 0.785±0.021 olarak tespit edilmifltir. ‹ncelenen K›l keçisi populasyonun Hb lokusu bak›m›ndan dengede olmad›¤› saptanm›flt›r. Anahtar Sözcükler: K›l Keçisi, potasyum, hemoglobin, polimorfizm Potassium and Haemoglobin Polymorphism in Hair Goat Raising in Antalya Province Abstract: In this study, whole blood potassium and haemoglobin (Hb) polymorphism were investigated in the Hair goats raised in the Antalya province. The separation of erythrocyte haemoglobin types was carried out using horizontal starch-gel electrophoresis and the determination of the potassium level was done using an atomic absorption spectrometer in randomly chosen whole blood samples of 188 Hair goats. The gene frequency for the higher potassium (KH) was 0.985±0.038. As a result of this research, two haemoglobin gene alleles (HbA, HbB) were determined. The estimation of HbA allele gene frequency was 0.785±0.021. The Hair goat population investigated in this study was not in equilibrium in terms of haemoglobin locus. Key Words: Hair goat, potassium, haemoglobin, polymorphism Girifl Evcil çiftlik hayvanlar›n verimlerinin ›slah›nda öncelikle üzerinde durulan özellik bak›m›ndan populasyonun genetik yap›s›n›n çok iyi tan›mlanmas›, takip edilmesi ve de¤erlendirilmesi gerekir. Genlerin ve mekanizmalar›n›n tan›nmas› ›slah faaliyetlerinin h›zl›, güvenilir ve verimli olmas›n› sa¤lar (1). Bir populasyonu oluflturan bireylerin genetik, biyokimyasal ve biyofiziksel yöntemlerle araflt›r›lmas›, o populasyonun genetik yap›s›na iliflkin daha ayr›nt›l› ve kesin bilgilerin elde edilmelerine olanak verir (2). Polimorfik biyokimyasal sistemlerin ço¤unun erken yaflta saptanmas›, çevre etkilerinden etkilenmemesi, genel olarak kodominant kal›t›m göstermesi ve polimorfik karakterler ile çeflitli verim özellikleri aras›ndaki iliflkilerin ›rka özel olmas› biyokimyasal polimorfizmden yararlanma çal›flmalar›na h›z kazand›rm›flt›r. Ülkemizde bu güne kadar özellikle koyunlarda kandaki biyokimyasal polimorfik özelliklerle verim özellikleri aras›ndaki iliflkiler ve bunlar›n polimorfik yap›lar› de¤iflik araflt›r›c›lar taraf›ndan incelenmifltir (36). Ancak özellikle keçilerde benzer çal›flma say›s› nispeten azd›r (7,8). Araflt›rman›n yap›ld›¤› yörede K›l keçi yetifltiricili¤inin önemi oldukça fazlad›r. Antalya yöresi K›l keçisi varl›¤› bak›m›ndan (694017 bafl) Türkiye' nin en yo¤un ilidir (9). Bu araflt›rma yörede yetifltirilen K›l keçisinin çal›fl›lan sistemler bak›m›ndan genetik yap›s›n› tespit etme¤i amaçlam›flt›r. Bu flekilde ileride daha fazla sistemler için yap›lacak çal›flmalara temel olmas› ve K›l keçilerinin verim özelliklerinin ›slah› yönünde yürütülecek araflt›rmalara katk› sa¤lanmas› amaçlanm›flt›r. * Bu çal›flma 99.01.0121.03 numara ile Akdeniz Üniversitesi Rektörlü¤ü Araflt›rma Fonu Baflkanl›¤›nca desteklenmifltir. 761 Antalya ‹linde Yetifltirilen K›l Keçilerinde Potasyum ve Hemoglobin Polimorfizmi Materyal ve Metot Bulgular ve Tart›flmalar Potasyum Polimorfizmi Materyal Metot Kan örnekleri, 188 keçinin boyun toplar damar›ndan (vena jugularis) 10 cc'lik antikoagulantl› cam tüplere al›nm›flt›r. Daha sonra, içinde 10 cc saf su bulunan cam tüplerde 100 ml tüm kan örne¤i hemoliz edilerek kan›n 100 kat suland›r›lmas› sa¤lanm›flt›r. Geriye kalan tüm kan örnekleri 3000/15 devir/dakika santrifüj edilerek hemoglobin tiplemesi için eritrosit k›s›mlar› ay›r›lm›flt›r. Potasyum analizleri Akdeniz Üniversitesi Ziraat Fakültesi Merkez Laboratuar›’nda bulunan atomik absorbsiyon spektrometre cihaz›nda yap›lm›flt›r. Cihaz›n potasyuma iliflkin kalibrasyon e¤risi ayarlanm›fl ve yap›lan analiz sonucunda okunan tüm kan potasyum de¤erleri afla¤›da verilen formül kullan›larak mEq/l olarak hesaplanm›flt›r. mEq/L=[K(mg) / 39 (atom a¤›rl›¤›)]*10 Hemoglobin tiplerinin ay›r›m› Gahne ve ark. (10)'na göre sürekli tampon sistemi kullan›larak Uluda¤ Üniversitesi Ziraat Fakültesi Zootekni Bölümünde bulunan yatay niflasta jel elektroforezinde yap›lm›flt›r. Hemoglobin analizi için jel: 11 g hidrolize niflasta (Sigma-S 4501), 30 ml saf su ve 70 ml tampon çözelti kar›flt›r›larak haz›rlanm›flt›r. Niflasta jeli tampon küvetine yerlefltirildikten sonra elektroforez ifllemine önce 150 voltla bafllanm›fl, sonra ak›m kesilmifl ve filtre ka¤›tlar› jelden al›narak elektroforez ifllemine 300 voltta devam edilmifltir. Elektroforez iflleminden sonra jel boyama solüsyonuna al›nm›fl ve befl dakika boyand›ktan sonra y›kama solüsyonu ile üç kez y›kanm›flt›r. Potasyum allellerinin gen frekanslar›n›n hesaplanmas›nda karekök yöntemi, hemoglobin allellerinin gen frekanslar›n›n hesaplanmas›nda lokus say›m yöntemi kullan›lm›flt›r (11). Potasyum ve hemoglobin allel frekanslar›n›n standart hatalar› Li (12)’ye göre hesaplanm›flt›r. Araflt›r›lan populasyonun genetik dengede olup olmad›¤› yap›lan Khi-Kare testiyle kontrol edilmifltir. 762 Potasyum polimorfizmi için toplam 188 adet K›l keçisinin kan› incelenmifl. Tespit edilen tüm kan potasyum ve sodyum konsantrasyonlar›na iliflkin da¤›l›m bimodalite göstermifltir. Ancak potasyum tiplemesinin yap›lamad›¤› da¤›l›m›n orta k›sm›nda 15,9487-17,7949 mEq/l de¤erleri aras›nda kalan 15 K›l keçisine ait de¤erler üst üste geldi¤i için hesaplama d›fl› b›rak›lm›fl ve de¤erlendirme toplam 173 keçi üzerinden yap›lm›flt›r. Tüm kan potasyum ve sodyum konsantrasyonuna iliflkin de¤erlere ait da¤›l›m fiekil 1. de gösterilmifltir. fiekil 1. de görüldü¤ü gibi 9,000-14,9231 mEq/l de¤erleri aras›nda ortalamas› 11,65±1,02 olan 5 keçi düflük potasyum konsantrasyonuna (LK) sahip olurken, 18,2564-29,5640 mEq/l de¤erleri aras›nda ortalamas› 23,157 mEq/l ±0,203 olan 168 keçi yüksek potasyum konsantrasyonuna (HK) sahip olmufllard›r. HK tipinin allel frekans› (KH) 0,985±0,038 olarak bulunmufltur. Potasyum de¤erleri bak›m›ndan elde edilen bu sonuçlar bir çok çal›flma ile benzerlik göstermektedir. Jamunapari ve Sirohi keçisi, tüm kan potasyum seviyesi bak›m›ndan incelenmifl ve incelenen tüm hayvanlar›n HK tipli oldu¤u görülmüfltür (13). Erkek Marwari keçilerinde yap›lan çal›flma sonucunda % 53 düzeyinde HK tipli, % 47 düzeyinde ise LK tipli keçiler tespit edilmifltir. ‹ngiltere'de yetifltirilen Saanen ›rk› keçilerde HK tipi oran› % 97,62, LK tipi oran›n› % 2,38, Anglo Nubian ›rk›nda ise s›ras›yla % 91,67 ve % 8,33 olarak bulunmufltur (14). ‹spanya' da yetifltirilen 14 keçi ›rk›nda yap›lan baflka bir çal›flmada bir ›rk hariç di¤er tüm ›rklarda HK allelinin LK allelinden daha fazla oldu¤u saptanm›flt›r (15). 150 140 Na mEq/L Bu araflt›rmada materyal olarak, Antalya ‹li Merkez ‹lçede bulunan Doyran ve Feslikan yaylalar›nda halk elindeki K›l keçisi sürülerinden temin edilen keçiler kullan›lm›flt›r. Söz konusu iki yaylada bulunan 9 ayr› sürüde toplam 188 hayvandan kan örne¤i al›nm›flt›r. 130 120 110 100 90 10 20 K mEq/L fiekil 1. Potasyum ve sodyumun serpilme diyagram›. 30 K. KARABA⁄, M. S. BALCIO⁄LU, M. Z. FIRAT, H. ‹. YOLCU Türkiye’de Konya yöresinde yetifltirilen K›l keçilerinde yap›lan bir çal›flmada KH allel frekans› 0,97 olarak bulunmufltur (7). Yine Ankara keçilerinde gerçeklefltirilen araflt›rmada 742 keçinin 436's›n›n LK, 306' s›n›n da HK tipinde oldu¤u saptanm›flt›r (16). Ayn› flekilde Kuzeybat› Hindistan keçilerinde yap›lan bir çal›flmada KL allelinin KH allelinden fazla oldu¤u bildirilmifltir (17). Bu bildirifllere göre keçilerde HK tipinin predominant ve adaptif öneme sahip oldu¤u söylenebilir. Gerçekten de keçilerde oldu¤u gibi koyunlarda da eritrosit potasyum konsantrasyonu bak›m›ndan görülen farkl›l›¤›n, bu türlerde adaptif bir öneme sahip oldu¤u bildirilmifl ve ‹ngiltere’de yüksek bölgelerde yetifltirilen koyunlarda HK tipinin alçak bölgelerde yetifltirilenlere nazaran daha fazla oldu¤u saptanm›flt›r (18,19). Buna göre tüm kan potasyum konsantrasyonu ›rklar›n veya farkl› ekotiplerin karfl›laflt›r›lmas›nda önemli bir parametre olarak kullan›labilir. Hemoglobin Polimorfizmi Hemoglobin tiplemesi için toplam 188 keçiden kan örne¤i al›nm›fl ancak bunlar›n 186’s› üzerinde çal›flma yap›labilmifltir. Yap›lan elektroforetik analizler sonucunda Hb genotipleri allel frekanslar› ile Hb genotiplerinin gözlenen ve beklenen de¤erleri Tablo1'de gösterilmifltir. Tablo 1 incelendi¤inde, 186 K›l keçisinin 126's› HbAA, 20'si HbBB ve 40'› da HbAB fenotip/genotipinde oldu¤u A görülmektedir. Hb allel frekans› 0,785±0,0213 olarak tahmin edilmifltir. Bu sonuçlara göre HbA allel frekans›n›n HbB ye göre daha yüksek oldu¤u saptanm›flt›r. Konya yöresinde yetifltirilen K›l keçilerinde yap›lan çal›flma (7) ile karfl›laflt›r›ld›¤›nda gen frekanslar›n›n da¤›l›m› bak›m›ndan oldukça benzerlik olmas›na karfl›n, genotip frekanslar›n›n da¤›l›m› bak›m›ndan farkl›l›k bulunmaktad›r. Heterozigot genotiplerin gözlenen frekanslar›n›n beklenen frekanslara nazaran daha düflük oldu¤u buna karfl›n homozigot genotiplerde durumun tam tersi oldu¤u gözlenmifltir. Bu durum populasyonda homozigotlar›n lehine bir seleksiyon oldu¤unu göstermektedir. Yap›lan genetik denge testi de bu sonucu do¤rulamaktad›r. Araflt›r›lan K›l keçisi populasyonu Hb lokusu bak›m›ndan Hardy-Weinberg dengesinde bulunmam›flt›r (p<0.05). Yap›lan karfl›laflt›rmalar sonucunda Tablo 1’ de verilen gen frekanslar›n›n bir çok araflt›r›c›n›n (7,13,16,20,21) farkl› keçi ›rklar›nda ayn› alleller için saptad›klar› frekanslarla uyum içinde oldu¤u anlafl›lm›flt›r. Buna karfl›n Güney Afrika (21,22), Sirohi (13), Barbari ve Black Bengal (23) ›rk› keçilerde yap›lan araflt›rmalarda ise HbA allelinin monomorf oldu¤u saptanm›flt›r. Tablo 1. Antalya yöresi K›l keçilerinin Hb genotip ve allel frekanslar›n›n da¤›l›m›. Hemoglobin Genotipleri N 186 HbAA HbBB HbAB 126 20 40 (115,1) (9,1) (61,5) Allel Gen Frekanslar› HbA HbB 0,785±0,021 0,215±0,021 Kaynaklar 1. Day›o¤lu, H., Emsen, H., Do¤rul, F.: Atatürk Üniversitesi Koyun Sürülerinin Transferrin Polimorfizmi Yönünden Genetik Yap›s›. Atatürk Üniv. Zir. Fak. Dergisi. 1989; 20: 38-45. 2. Asal, S.: Koyunlarda Transferrin Polimorfizmi Üzerine Bir Çal›flma. Ankara Üniversitesi Ziraat Fakültesi Y›ll›¤›. 1989; 40, (1-2): 373383. 3. Pembeci, M.: Atatürk Üniversitesi Koyun Populasyonlar›nda Kan Potasyum Seviyelerinin Kal›t›m› ve Verimle ‹lgileri. Doktora Tezi. Erzurum, 1978. 4. Soysal, M.‹.: Atatürk Üniversitesi Koyun Populasyonun Baz› Kal›tsal Polimorfik Kan Proteinleri Bak›m›ndan Genetik ve Bu Biyokimyasal Karakterler ile Çeflitli Verim Özellikleri Aras›ndaki ‹liflkiler. Doktora Tezi. Erzurum, 1983. 5. Boztepe, S.: Tigem Gözlü Tar›m ‹flletmesindeki Akkaraman ve ‹vesi Koyun Sürülerinin Kan Potasyum ve Hemoglobin Tipleri ile Baz› Verim Özellikleri Aras›ndaki ‹liflkiler. Doktora Tezi. Konya, 1992. 6. Balc›o¤lu, M.S.: Türkiye Ya¤l› Kuyruklu Koyun Irklar›nda Genetik Varyasyon. Doktora Tezi. Ankara. 1995. 7. Boztepe, S., Özbayat, H.‹., Kay›fl, S.A.: K›l Keçilerinde Kan Potasyum ve Hemoglobin Polimorfizmi. Selçuk Üniv. Zir. Fak. Derg. 1993; 3, (5): 89-96. 8. Elmac›, C.: Ankara Keçilerinde (capra hircus) Kan Proteinleri Polimorfizmi ile Baz› Tiftik Özellikleri Aras›ndaki ‹liflkiler. Doktora Tezi. Ankara, 1995. 9. Anonim 2000.: Antalya Tar›m ‹l Müdürlü¤ü 1999 Çal›flma Raporu. Antalya. 10. Gahne, B., Rendel, J., Venge, O.: Inheritance of β-globulins in Serum and Milk From Cattle. Nature. 1960; 186: 907-908. 11. Nei, M.: Genetic Distance Between Populations. Am. Naturalist. 1972; 106 (949): 283-292. 763 Antalya ‹linde Yetifltirilen K›l Keçilerinde Potasyum ve Hemoglobin Polimorfizmi 12. Li, C.C.: First Course in Population Genetics. Boxwood Press. California. 1978. 13. Bhat, P.: Genetic Markers in Jamunapari and Sirohi Goat Breeds. Indian J. Anim. Sci. 1986; 56, (4): 430-433. 14. Khan, M.S., Taneja, G.C.: Blood Potassium Heterogenity in Rajasthan Desert Goat. Indian J. Anim. Sci. 1983; 53, (7): 782783. 15. Tunon, M.J., Gonzales, P., Vallejo, M.: Blood Biochemical Polymorphism in Spanish Goat Breeds. Comp. Biochemical Physiological. 1987; 88B, (2): 513-517. 16. Erkoç, F.Ü., Alparslan, Z.N., U¤rar, E.: Red Blood Cell Potassium Types of Angora Goats (Capra hircus). Comp. Biochemical Physiological. 1987; 87A, (1): 9-11. 17. Kumar, S., Yadov, B.R.: Transferrin Polymorphism in Goat Breeds of North Western India. Int. J. Anim. Sci. 1988; 3, (1): 97-100. 18. Evans, J.V., Mounib, M.S.: A Survey of the Potassium Concentration in the Red Blood Cells of British Breeds of Sheep. J. Agr. Sci. 1957; 48, (4): 433-437. 764 19. Evans, J.V., Harris, H., Warren, F.L.: Haemoglobin and Potassium Blood Types in Some non-British Breeds of Sheep and in Certain Rare British Breeds. Nature. 1958; 182: 320-321. 20. Osterhoff, D.R., Ward-Cox, J.S.: Serum Polymorphism in Three South African Goats Breeds. Proceedings of the 12th European Conference on Animal Blood Groups Biochemical Polymorphism (Budapest). 1970; 579-582. 21. Tucker, E.M., Clarke, S.W., Osterhoff, D.R. and Groenewalt, J.: An investigation of Five Genetic Loci Controlling Polymorphic Variants in the Red Cell of Goats. Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. 1983; 14: 269-277. 22. Ricardeau, G.: Gene Identification in Goats. In: K. Maijala (editor), Genetic Resources of Pig, Sheep and Goat. Elsevier Sciences Publishers. 1991; 31: 471-493. 23. Baruah, P., Bhat, P.P.: Note on the Genetics of Haemoglobin and Transferrin Polymorphism in Three Breeds of Indian Goats. Indian J. Anim. Sci. 1980; 50, (7): 576-579.