MONOCLONAL Anti-Kell

MONOCLONAL Anti-Kell
0843
Tube, Slide, Diamed-ID and Microplate Tests
Blood Grouping
6.
İnsanda eritrosit K antijenin belirlenmesi için kalitatif test
IVD
2-8ºC’de sakla
METHOD PRENSİBİ
Reaktifler, K antijeni taşıyan test eritrositlerin direkt aglütinasyonuna (pıhtılaşma) neden
olacaktır. Aglütinasyon olmaması genellikle K antijeninin yokluğunu gösterir (Sınırlamalara
bkz).
KLİNİK ÖNEM
1946 yılında K antijeni rapor edildi. Antijen doğumda tamamen gelişir ve güçlü immünojenik
olabilir. Anti-K, hemolitik Transfüzyon Reaksiyonları ve yenidoğanların hemolitik hastalıkları
içermiştir.
Anti-K
+
+
0
0
Anti-k
0
+
+
0
Fenotip
K+kK+k+
K-k+
Ko
Beyaz Irk %
Afro-Amerikalılar %
0.2
Nadir
8.8
2.0
91.0
98.0
Fazlasıyla nadir
REAKTİFLER
Spinreact monoklonal Anti-K kan gruplama reaktifleri sığır albumin (6 g%) , makromoleküler
potentiators, sodyum klorür (0.9 g%) içeren fosfat bir bufferda dilüe edilmiş klon MS-56,
monoklonal IgM antikoru içeren düşük protein reaktifidir. Her reaktif daha fazla dilüsyon veya
eklemeye gerek olmadan aşağıda belirtilen tüm öneri teknikleriyle optimum dilüsyonda
verilmiştir. Lot referans numarası ve son kullanım tarihi için Şişe Etiketine bakın.
ÖNLEMLER
1. Reaktifler sadece in vitro diagnostik kullanım için tasarlanmıştır.
2. Eğer bir reaktif şişesinde kırık veya sızıntı varsa, hemen içeriğini atın.
3. Son kullanım tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın (Şişe etiketlerine bakın).
4. Eğer çökelti mevcutsa, reaktifleri kullanmayın.
5. Reaktiflerle çalışılırken tek kullanımlık eldiven ve laboratuar önlüğü gibi koruyucu giysileri
giyinmelidir.
6. Reaktifler bir 0,2 mikron kapsül ile biyo-yükünü azaltmak için filtre edilmiştir. Bir şişe bir
kez açıldığında içeriği eğer belirgin bozulma ve bulanıklık göstermediği sürece son kullanım
tarihine kadar kalabilir.
7. Reaktifler < 0.1% sodyum azid içerir. Eğer patlayıcı metal azit formu ile bakır ve kurşun
borular reaksiyona girerse veya yutulursa, sodyum azit toksik olabilir. Çok miktarda su ile
yıkayarak uzaklaştırın.
8. Malzemeler ürünleri üretmek için kullanılan kaynakta test edildi ve kabul edilmiş
mikrobiyolojik testleri kullanan HBsAg ve HIV 1+2 ve HCV antikorları için negatif olarak
bulundu.
9. Bilinen hiçbir test insan ve hayvan kaynaklı ürünlerin enfeksiyon etkeni taşımadığını
garanti edemez. Kullanım sırasında ve her şişenin ve içeriklerinin imhasında dikkatli
olunmalıdır.
10. Dökülen reaktiflerin ve dekontaminasyonunun atılması ile ilgili bilgi için mevcut olan
Malzeme Güvenlik Veri Sayfalar’ına bakın.
NOTLAR
1. Bir pozitif kontrol (ideal olarak heterozigot) ve negatif kontrol testlerin her bir lotuyla paralel
test edilmesi önerilir. Eğer kontrol beklenen sonuçlar göstermiyorsa, testler geçersiz olarak
kabul edilmelidir.
2. Hastanın eritrosit tiplendirmesini yaparken reaktifin negatif kontrol içermesi önemlidir.Çünkü
IgG kaplı hücrelerle makromoleküler etkileşimciler yanlış pozitif reaksiyonlara neden olur.
3.Zayıf K antijenleri jel kartı, mikrotitre plaka ve slayt tekniği ile zayıfça tespit edilebilir. Zayıf K
antijenleri tüp test tekniği kullanılarak test edilir.
4.Önerilen tekniklerde şişe damlalık kullanıldığında bir hacim yaklaşık 40μl olarak alınmalıdır.
5.Reaktiflerin kullanımı ve sonuçların yorumlanması reaktifler kullanımdaysa o ülkenin
şartlarına göre eğitimli ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır.
6.Kullanıcı diğer teknikleri kullanmak için reaktiflerin uygunluğunu belirlemelidir.
SAKLAMA
Dondurmayın. Reaktif şişeleri 2 -8ºC ‘de saklanmalıdır. Bu aralığın dışındaki sıcaklıklarda uzun
süreli saklanmada reaktifin reaktivitesinin kaybına neden olabilir.
GEREKLİ MATERYALLER
•
Cam test tüpler (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).
•
Test tüp santrifüjü.
•
Volumetrik pipetler.
•
Cam mikroskop slaytları
•
Aplikatör çubukları.
•
Fosfat Buffer tuzu (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC.
•
Pozitif (ideal olarak Kk) ve negatif (kk) kontrol kırmızı hücreler.
•
DiaMed ID-Kardlar (Nötr).
•
DiaMed ID-Sentrifüj.
•
DiaMed ID-Diluent: e.g. ID-CellStab.
•
Plaka çalkalayıcısı.
•
Otomataik plaka okuyucu.
•
Onaylı "U" kuyu mikroplakaları
•
Mikroplaka Sentrifüjü.
İnkübasyon boyunca 3 ve 4’üncü adımları tekrar edin.
B. Slayt Yöntemi
1.Serum, plazma veya PBS de 35-45% süspansiyon test eritrosit hazırlayın.
2.Etiketli bir testi slayt üzerine 1 hacim Anti- K reaktifi ve 1 hacim test eritrosit süspansiyonu
yerleştirin.
3.Temiz bir aplikatör çubuğu kullanın ve yaklaşık 20 x 40 mm lik bir alan üzerinde reaktif ve
hücreleri karıştırın.
4. Oda sıcaklığında slaytı hafiçe eğerek arkaya ve yana doğru 30 saniye kadar çalkalayın.bu
işlemi 2 dakika süreci içinde arada bir tekrarlayın .
5. Diffüz bir ışık üzerinde 2 dakika sonra makroskopik olarak okuyun ve fibrin ipliklerini
aglütinasyon olarak değerlendirip hata yapmayın.
6.Zayıf gerçekleşen reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
C. DiaMed-ID Mikro Tipleme Tekniği
1.
Bir ID-Dilüent ile % 0.8 süspansiyon yıkanmış test eritrosit hazırlayın.
2. Gerektiği kadar mikrotüpleri alüminyum folyodan çıkarın.
3. Uygun mikrotüp içine 50μl test eritrosit süspansiyonu ve 25μl Anti-K reaktif yerleştirin.
4. ID Kartları 90 rcf de 10 dakika boyunca ya da uygun alternatif bir zaman ve güçle
sentrifüjleyin.
5. Aglütinasyon için makroskopik olarak okuyun.
D. Mikroplaka Teknik, “U” kuyularında kullanılan
1.PBS içinde 2-3% süspansiyon yıkanmış test eritrosit hazırlayın.
2. Uygun kuyular içine 1 hacim Anti-K reaktif and 1 hacim test eritrosit süspansiyonu koyun.
3. Tercihen mikroplaka çalkalayıcı kullanarak uygun şekilde çalkalayın, kuyudan kuyuya
bulaşma olmamasına dikkat edin .
4.15 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin (zaman kullanıcıya bağlı).
5.140 rcf de 1 dakika boyunca veya uygun alternatif bir zaman ve güçle mikroplakaları
sentrifüjleyin.
6.Mikroplaka çalkalayıcısında çalkalanmayı kontrol ederek hücre çökeltisini dikkatlice tekrar
süspansiyon hale getirin.
7.Makroskobik olarak veya doğrulanmış otomatik bir okuyucu ile okuyun.
8.Zayıf reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI
1. Pozitif: Kabul edilebilir test koşullarında test eritrositlerinin aglütünasyon ile pozitif sonuç
vermesi test hücrelerinde yeterli miktarda K antijeni olduğunu gösterir.
2.
Negatif: Kabul edilebilir test koşullarında test eritrositlerinin aglütünasyon ile negatif
sonuç vermesi test hücrelerinde K antijeni olmadığını gösterir
3. Negatif kontrol ile aglütinasyon veren hücreler dışlanmalıdır. Duyarlı hücreler ile reaktif
içindeki makromoleküler etkileşimcilerin yalancı reaksiyon vermesi aglütinasyon gibi görünür.
Reaksiyon stabilitesi
1. Santrifüjlemeden sonra tüm tüpleri ve mikroplaka testleri doğru okuyun.
2.
Slayt testler iki dakika içinde değerlendirilmelidir. Negatif sonuçlar kurumaya bağlı olarak
yanlışlıkla pozitif olarak değerlendirilebilir
3.
Belirtilerden başka sıcaklıklarda yapılan testlerin sonuçlarının yorumlanmasına dikkat
edilmelidir.
SINIRLAMALAR
1.Saklanan kan taze kandan daha zayıf reaksiyon verir.
2.Yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuçlar:
•
Test malzemelerinin kirliği,
•
Sakalama, hücre konsantrasyonu, inkübasyon süresi veya sıcaklığın uygunsuzluğu,
•
Uygunsuz veya aşırı santrifüjleme,
•
Önerilen tekniklerden sapma nedeniyle oluşabilir.
5. Kullanıcı belirtilenlerden başka methot uygularsa reaktifin performansından kendisi
sorumludur.
9
6. Önerilen tekniklerindenkaynaklanan sapmalar kullanım öncesi doğrulanmış olmalıdır .
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
1. Reaktifler, burada belirtilen tüm prosedürler ile karakterize edilmiştir.
2. Serbest kalmadan önce, Spinreact Monoklonal Anti-K’in her bir lotu uygun reaktivite
sağlamak için antijen-pozitif eritrositin bir paneline karşı önerilen teknikler ile test edildi.
3. Monoklonal antikor kaynağının özgünlüğü antijen-negatif hücrelerinin bir panelini
kullanarak kanıtlanmıştır.
4. Reaktifin kalite kontrolü eritrosit kullanılarak yapıldı ve bu hücreler kullanımdan önce PBS
ile iki kez yıkandı.
5. Reaktifler İngiltere Kan Transfüzyon Hizmetleri Rehberinin son sayısında yer alan
önerilere uymalıdır.
BİBLİYOGRAFYA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
NUMUNE
Antikoagülanlı veya antikoagülansız olarak elde edilen kan örnekleri antijen tiplendirmesi için
kullanılabilir. Eğer test gecikirse örnekler 2-8 ° C'de saklanır. EDTA ve sitrat numuneleri 48
saat içinde tiplendirilmelidir. ACD, CPD veya CPDA-1 içinde toplanan numuneler çekildiği
tarihten 35 güne kadar test edilebilir. Tüm kan numuneleri test edilmeden en az iki kez PBS ile
yıkanmalıdır. Hemoliz görüntüsüne sahip kan numuneleri güvenilmez sonuç verebilir
Kholer G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined
specificity. Nature 1975, 256, 495-497.
Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers
1975, Chapter 2.
Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3rd Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985,
Chapter 10.
Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8th Edition, Oxford, Blackwell Scientific
Publications, 1987, Chapter 7.
Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force.
Recommendations for evaluation, validation and implementation of new techniques for blood
grouping, antibody screening and cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
PACKAGING
Monoclonal Anti-Kell
Ref: 1700039
5 ml
PROSEDÜR
A. Tüp Yöntemi
1. PBS içinde % 2-3 süspansiyon yıkanmış test eritrosit hazırlayın.
2. Etiketli bir test tüp içine 1 hacim Anti- K reaktifi ve 1 hacim test eritrosit süspansiyonunu
yerleştirin.
3. İyice karıştırın ve Bütün tüpleri 1000 rcf de 20 dakika boyunca veya uygun bir alternatif
zaman ve devirde santrifüjleyin.
4. Eritrosit çökeltisini hafifçe sallayın ve aglütinasyonu makroskopik olarak okuyun.
5. Negatif veya şüpheli bir sonuç gösteren tüpler oda sıcaklığında 15 dakika inkübe
edilmelidir.
GSIS11
Ed.2005
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com